蛇毒的纤溶与抗凝作用

(―) 纤维蛋白溶解

有研究人员发现，蛇毒以粗蛇毒为原料，对纤维蛋白有水解作用。在这种情况下，很难确定它们的作用机制。上述作用可能有四种情况：首先，蛇毒中确实含有作用于纤维蛋白的酶。这些酶可能对纤维蛋白有特异性的水解作用，也可能是非特异性的；由于该成分的作用，纤溶酶的活性增加，从而加强纤维蛋白的水解。需要指出的是，纤维蛋白溶解活性不同于纤维蛋白原水解活性。后者作用于纤维蛋白原，使其变成无法凝固的碎片。在纤溶酶作用后，血液通常不再凝固。

欧阳等。 (1976)首先从蕲蛇毒液(AAV)中分离纯化出一种纤溶酶，分子量为24000，等电点为3.8，可直接作用于纤维蛋白(分子量70000)的a(A)链特异性裂解成分子量为46000 和24000 的链），但对链（B）和链Y 没有影响。 Chen Yixiang 等。 (1987) 还从AAV 中纯化出一种碱性纤溶酶，其分子量为28,000，等电点为8.1，作用于纤维蛋白的cKA) 链。肖长华等。 (1986)在动、静脉血栓形成和肺栓塞的实验模型中测试了AVV“溶栓酶”(含有碱性纤溶酶3种以上成分)，具有非常显着的抗血栓和溶栓作用。

叶志章等。等(1981)从白花蛇毒中得到2个初步纯化的酸性纤溶酶，它不仅具有直接的纤溶活性，而且具有激活纤溶酶的活性。两者都有效。张定武等。等(1987)还从白花蛇毒中纯化出一种碱性纤溶酶，分子量为67000，等电点为8.4，属于金属蛋白酶。

欧阳等。 (1976)还从柯铁头竹叶青等蛇毒中分离纯化了纤溶酶。其中，铁头蛇毒含有两种作用不同的纤溶酶，一种同时作用于纤维蛋白的a(A)和p(A)链，另一种只作用于a(一）链。

Egen等（1987）用制备型等电聚焦电泳从铜头蛇毒液中分离出一种纤溶酶，它能溶解血块，其作用是直接的，不是通过激活纤溶酶原间接起作用的。

巴杰瓦等。 (1980) 发现西部小菜蛾的毒液中含有纤维蛋白溶解成分，并对其进行了部分纯化。分子量测定表明该组分的分子量在6000021500之间。

达乌德等人。 (1987) 从Cenwtocenses 蛇毒中分离出一种抗凝血成分，命名为CemstaseF-4，具有酪蛋白水解、纤维蛋白原水解和纤维蛋白溶解活性。紫外吸收光谱分析表明该组分中Tyr和Try的含量很高，EW%=0.84。 C.D谱研究表明该组分含有23.%的0-螺旋、34%的-折叠和32.5%的松散结构。以酪蛋白为底物时，反应的最适pH为10.0，Km为1.45g/L。 Cerast^iseF-4是一种金属蛋白，每个分子含有1个Ca2+和1个Zn2+，酶活性可被EDTA和EGTA抑制，Ca2+、Mg2+和Zn2+可部分激活酶。可以假设Ca2+Zn2+ 在维持酶的结构和催化功能方面起着重要作用。

除上述蛇毒外，蕲蛇毒液中还含有纤溶成分，其抗凝血作用与该成分有关。

研究资料表明，纤溶酶的研究重点在于纯化和作用位点的研究，对活性中心、结构和功能的研究较少，其作用机制尚不明确。申请的进展也很缓慢。虽然早就发现蛇毒纤溶酶没有抗原反应，但纯纤溶酶的临床应用至今未见报道。我国生产的抗血栓酶的主要成分是类凝血酶。据分析，它还含有纤溶酶。据张定武等人介绍，白花蛇抗血栓酶的副作用，如发热、荨麻疹等，可能与纤溶酶有关。蕲蛇毒、蕲蛇毒等纤溶酶大多具有出血活性，同时可使血小板大幅度减少，可能引起自发性出血。

(2) 纤维蛋白原溶解

一些蛇毒含有可以水解纤维蛋白原的成分。它们不同于凝血酶样酶。水解纤维蛋白原后，它们不能引起凝固，而是将其水解成碎片。因此，这类酶作用于纤维蛋白原。非特异性水解肽键不同于凝血酶样肽键。有些纤溶酶可以水解A(«)链，有些可以水解B(P)链。根据这一特点，纤溶酶可分为两大类，一类称为A-纤溶酶，一类称为A-纤溶酶。一类叫做B型纤溶酶原溶解酶，当然也有一些可以水解A(a)和B((3)链。

欧阳等。 (1983)从白花蛇毒中分离出一种A-纤溶酶，它是一种单链肽，分子量为25360，等电点大于10.0。 6CTC在pH 5.6、7.4或8.8下加热30分钟可完全消除酶的活性，EDTA和半胱氨酸也可抑制其活性。该酶只能水解纤维蛋白原的A(a)链，对B(p)和7链的水解能力很小。此外，该酶还具有酪蛋白水解活性和纤维蛋白溶解活性。

二阶等。 (1983)从西部小菜蛾响尾蛇毒液中分离出一种纤维蛋白原溶解酶，该酶先水解纤维蛋白原的A(c)链，再水解B(b)链，其水解方式与The Crotdase相同从东部菱纹背响尾蛇毒液中分离出来的成分与此类似，不同之处在于后者是一种类似凝血酶的酶，可水解纤维蛋白原使其凝固。从中分离出的纤溶酶也能释放激肽，能水解TAME、BAEE和TLME，但不能水解BAA、TAA和ATEE。该酶是一种酸性蛋白质，等电点4.6，由272个氨基酸组成，分子量31000，其中酸性氨基酸占21%。蛋白酶则不同，大豆胰蛋白酶抑制剂不能抑制其活性，而DFP却能起到抑制作用，这说明这种酶是一种丝氨酸蛋白酶。研究还表明，这种酶在15ug/

毒中的纤维蛋白原溶解酶进行了分离纯化。他们共分离出I、I、I和IV等4种抗凝 组分，其中I和W不作用血浆中的纤维蛋白原，但能水解纯化的纤维蛋白原，水解作用时 先破坏A00链，然后再破坏B(卩)链和7链。这两种酶都是金属蛋白酶，每分子含一个 2!12+，£0丁人和32-球蛋白可以抑制其活性。I和IV都是单链肽，前者的分子量为20 000; 后者的分子量为46 000,含有一个游离的巯基，为糖蛋白。2种酶的最适pH为7.0,最适 反应温度为37°C。H和I对血浆中和纯化的纤维蛋白原都能水解，但它们只作用于B((3) 链，对A(a)链和7链没有影响。它们都为碱性丝氨酸蛋白酶，DFP和苯甲磺酰氟能够抑 制其活性。二者的最适反应温度为50℃〜65°C。I是单链状，含糖，分子量为31 000; m含 2个肽链，每个肽链分子量13 000,整个分子的分子量为24 000。I和I水解B(β)链后释 放出一个分子量为5 000的小肽，对AO)和7链没有影响。由于这2种酶可以作用于血 浆中的纤维蛋白原，推测它们与蛇伤后蛇毒产生的抗凝作用有关。现在还没有比较出 Toshiaki和Bhamt分离的纤维蛋白原溶解酶之间的异同，对它们之间的关系还难下结 论。

Shimizu等(1987)从铜头蝮蛇毒中分离出一种纤维蛋白原 溶解酶，该酶为一种单链肽，分子量60 000〜64 000。其活性可以被二硫苏糖醇抑制。它水 解纤维蛋白原B链的速度远远大于A链的速度，但随着温度的提高0°C〜45°C)，这种特 性变得越来越不明显。它的水解作用只能在中性条件下进行。Dyr等（1989)也对

蛇毒中的纤维蛋白原溶解酶进行了分离纯化。他们得到2种组分，这2 种酶水解纤维蛋白原A链和B链的速度不同，但都是丝氨酸蛋白酶，都含碳水化合物，分 子量都在68 000左右。它们的等电点也相近，分别为6. 4和5. 4。看来Shimiza等人分离 的纤维蛋白原溶解酶就是这2种酶中的1种。

Ouyang等在1976年就对洛铁头蛇毒中的纤维蛋白 原溶解酶作了研究，发现该毒中有2种纤维蛋白溶解组分。以后进一步发现这2种组分水 解方式不同，一种专一地水解纤维蛋白原的A(a)链，称为a-纤维蛋白原溶解酶，该酶还能 抑制血小板的聚集;另一种特异地水解纤维蛋白原的B((3)链，称为p-纤维蛋白原溶解酶， 该酶对血小板没有影响。最近，Teng等发现纤维蛋白原溶解酶水解人的纤维蛋白原比 牛的纤维蛋白原快，对人、狗、鸽和家兔血浆纤维蛋白原的水解作用依次减小。a-纤维蛋白 原溶解酶对上述4种动物血浆纤维蛋白的水解速度相近。研究还发现4种动物的血清都 能强烈地抑a-纤维蛋白原溶解酶对人纤维蛋白原的水解作用；而4种动物血清对屮纤维 蛋白原溶解酶的抑制作用不同，按家兔、鸽、狗、人的顺序依次减小，这说明2种酶对动物 血浆纤维蛋白原的不同活性与其内的抑制因子强弱有关，如果去除抑制因子的干扰，这种 差别可能就不复存在。

Herbert等(1981)发现黑颈眼镜蛇蛇毒也能水解纤维蛋白原，水解 的对象为A(c0链，对B(β)链和7链作用很小，这种毒还能水解高度交联的纤维蛋白，其 水解作用也有选择性。研究还表明上述作用是蛇毒内某些因子直接作用的结果，与激活纤 维蛋白溶酶原无关。该毒的纤维蛋白原溶解活性可被EDTA和1，10-菲咯啉抑制，加

Zn2+可以逆转EDTA的抑制作用。水解纤维蛋白原的最适pH为7. 0〜8. 0,与大多数含 锌蛋白酶的最适pH相近。

除上述蛇毒中含有纤维蛋白原溶解酶外，K0rnalik(1971)发现食鱼蝮蛇毒，Boffa等发现毒蝰蛇毒也有这种组分。另外，很多具有纤维 蛋白溶解活性和酪蛋白水解活性的酶也能水解纤维蛋白原，只不过作用不太强而已，在这 种情况下，水解作用是非特异的。

(三）抑制血凝因子

毒蝰蛇毒和极北蝰蛇毒具有抗凝作用，它们通过与凝血酶原酶

(Prothrombinase)结合成复合物而使其失活，从而使凝血酶原不能形成凝血酶。Kamiguti 等(1985)发现心毒具有抗凝作用。经研究表明，该毒的抗凝作用至少 涉及二种机制;①在凝血酶原被激活前，抑制X因子的激活和Xa的活性;②直接作用于 凝血酶使凝血酶失去活性。Che-Ming Teng等(1981)从尖吻蝮蛇毒 中分离出一种抗凝组分，命名为AAV-Xal，在钙离子的存在下AAV-Xal能与Xa结合 形成复合物。AAV- Xal，能够抑制凝血酶原酶(Prothrombinase)水解凝血酶原，因而不能 产生凝血酶。AAV-Xal还能有效地与X因子形成复合物。

Banerjee等(1965)发现，如果圆斑蜂仏s)蛇毒先与含有草酸盐的血衆保 温，向该系统中加Ca2+也不能促进蛇毒对血浆的凝固。V. rtme/仏蛇毒是促凝蛇毒，因此 他们认为该毒中还含有可以破坏111因子的物质，即抗凝血激酶因子(Antithromb0Plastin factor)。以后Ouyang(1957)报道尖吻蝮（A acMto)蛇毒，烙铁头（7 mMcrowMawa加）蛇 毒和眼镜蛇丹山亚种蛇毒也有抗凝血激酶作用。克蛇毒在高浓度时 表现促凝作用，而在低浓度时表现为抗凝作用，和蛇毒的抗凝作用也部分与它的抗凝血激酶活性有关。Mackay等(1969)对3种眼镜 蛇毒黑唇眼镜蛇、黑颈眼镜蛇和眼镜王蛇蛇毒的抗凝作用进行了研究，发现这些蛇毒的抗凝作用是由于干扰了凝 血激酶的形成。Mackay等（1966)认为白唇曼巴蛇毒的抗凝作

用也是通过上述相似的途径进行的，即或者破坏凝血激酶，或者抑制凝血激酶的生成。 Barkagan等(1967)报道，眼镜蛇外里海亚种蛇毒能使K因子失活，表现 为抗凝血激酶活性。0marow(1969)发现这种蛇毒还能抑制V、M、W、XI和Xm的活性。冲 绳烙铁头蛇毒有促凝和抗凝双重活性，抗凝作用与抑制凝血激酶形成有 关。

(四）抗凝血酶作用

早在1938年Haunt就报道眼镜蛇蛇毒在体外能使凝血酶失活，但以后没见这方面的报道，是否真有这种组分还不能确定。

(五）对蛋白C的激活作用

Protein C是血浆中的一种糖蛋白，分子量为62 000,由一条轻链和一条重链组成，经 凝血酶作用后变成一种丝氨酸蛋白酶并释放出一种分子量为1 400的激活肽。激活的 Protein C可以水解V a和Wa使其失活，因而具有抗凝作用。另外，活化的Protein C通过 一种还不太清楚的机制激活纤溶系统从而起到间接抗凝作用。

Stocker等（1987)从铜头峻对)蛇毒中分离出一种Protein C活 化因子。该因子是一种含糖的单链肽，含糖20%，分子量37 000左右，等电点3. 0±0. 2。 这种因子可以激活人或其他各种脊椎动物血浆中的Protein C。免疫扩散研究表明各种铜 头竣食鱼竣和墨西哥複亚种的蛇毒中都含有相似的Protein C激活剂。

(六）对纤维蛋白溶酶原的激活

犀咝蝰蛇毒具有抗凝作用，能够激活纤维蛋白溶酶原使之成为纤维 蛋白溶酶(Plasmin)，后者对纤维蛋白进行水解，从而间接起到抗凝作用。另一方面，Sto 蛇毒还能增强尿激酶对纤维蛋白溶酶原的激活作用。这是由于它对纤维蛋白溶 酶原分子的蛋白水解作用改变了纤维蛋白溶酶原分子的高级结构，使其暴露出更多的 Arg—Lys键，从而易为尿激酶活化。