蛇毒中 NAD

NAD-核苷酶水解烟酰胺N-核苷键。这种酶广泛存在于各种哺乳动物组织中，后来发现蛇毒也具有这种酶的活性。 Bhattacharya (1953) 首先证实了蛇毒中有一种分解NAD 的酶。他将蛇毒和NAD一起孵化，发现释放了烟酰胺。后来铃木等人。 (1960)测定了9种亚洲蛇毒，发现掌斑竹叶和银环蛇的毒液(加上哀乳蛇毒)也有这种酶的活性。NAD-核苷酶的比活性从毒液中分离出的NAD-核苷酶活性比粗毒液增加约5倍，无核酸外切酶活性。Tatsuki等（1975）系统研究了37种蛇毒中的NAD-核苷酶活性，发现只有下列蛇有此蛇毒中的酶：Agkistrodon japonica“食物” 对蛇毒中NAD-核酸酶的理化性质研究发现，该酶在pH 7.5时活性较高，在中性pH范围内稳定，在40时稳定，60以上失去活性。纯酶在pH为6.0、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中，-1CTC条件下保存6个月。活性仅降低10 %.可水解b-NAD+、NADP和3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸，Km值分别为8.3X10-4mol/L、5.7X10-4mol/L和7.4X10-4mol/L，但该酶可不水解a-NAD、NADH、NADPH 和NMN+。 MgCl2和1.010_3mol/L的半胱氨酸可抑制60%的水解活性，碘乙酸、PCMB和EDTA对其活性无影响。 Yost 和Anderson (1981) 可以催化Anderson (1981) 从蛇毒中分离出的NAD-核苷酶与吡啶碱基的交换反应。最近，我国学者黄万志等（1988）对白吻蛇毒液中的NAD-核苷酶进行了纯化，并对其理化性质和酶学性质进行了广泛的研究。她用DEAE-SephadexA-50、SephadexG-75、CM-SephadexC-50和SephadexG-100依次纯化NAD-核苷酶，结果所得样品的活性比粗毒提高了11.8倍，收率为3.9%。纯化酶反应的最适温度为40，最适pH为7.5。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳确定为条带，凝胶过滤和SDS-PAGE测定的分子量分别为98,000和50,000。末端氨基酸测定只发现一个脯氨酸，表明该酶由两个相同的亚基组成。分析还发现该酶是一种糖蛋白，等电点为7.6。这种酶含有金属离子，ED-TA能抑制其活性，说明金属离子是酶活性所必需的。该酶水解B-NAD、NADP和B-NGP的Km值为0.50mmol/L、0.13mmol/L和0.16mmol/L。

来自Tatsuki 等人的研究。 (1975)，可以看出NAD核苷酶的分布不是很广泛，主要存在于蛇类毒液中，其他种类的蛇毒中只有少数含有这种酶。在眼镜蛇属和海蛇毒液中未检测到这种酶。

NAD-核苷酶的研究吸引了众多科学家的关注。近年来发现NAD-核苷酶不仅能水解NAD等物质，还能催化ADP核糖基化（ADP-ribosylatkm）和聚ADP核糖（Poly-ADP-ri-bose）。比较蛇毒NAD-核苷酶和哺乳动物组织中NAD-核苷酶的酶学特性，发现前者不仅能水解NAD，还能水解吡啶衍生物，催化吡啶碱基取代反应。从脑和牛脾中分离出的不溶性NAD-核苷酶相似，而从牛精液中分离出的可溶性NAD-核苷酶活性不受烟酰胺抑制，也不能催化吡啶碱基的取代反应。