蛇毒蛋白分离技术影响电泳速度 因素

电泳速度和电泳迁移率是两个不同的概念。电泳速度是指单位时间内移动的距离（cm/t），迁移率是指单位电场强度下的电泳速度。但两者密切相关，电泳速度越大，迁移率越大。影响电泳速度的因素很多，如样品、电场强度、缓冲液、支持介质等。

（-）样本

待分离的电荷量与电泳速度成正比关系。电荷越高，电泳越快，反之亦然。另外，如果被分离物质的带电量相同，则分子量大的电泳速度慢，分子量小的电泳速度快。因此，分子大小与电泳速度成反比。球形分子比纤维状分子移动得更快。

(2)电场强度

电场强度与电泳速度成正比。电场强度计算为每厘米的电势差，也称为电势梯度。例如纸电泳的滤纸长15cm，两端电压（电位差）为150V，则电场强度为150/15=10V/cm。电场强度越高，带电粒子移动得越快。随着电压的增加，相应的电流也增加。如果太大，容易产生热效应，使蛋白质变性，无法分离。如高压电泳（电场强度50V/cm）必须配备冷却系统。

(3) 缓冲区

Buffer pH 不同的氨基酸和蛋白质有不同的等电点。当缓冲液的pH值在氨基酸和蛋白质的等电点时，它们处于正负电荷相等的等电状态，在一定电场下不会向正负电极移动。当pH值大于等电点时，氨基酸和蛋白质带负电并向正极移动。根据各种氨基酸和蛋白质的等电点不同，使用固定pH值（如pH8.6）的巴比妥缓冲液，施加一定的电场，分离各种氨基酸或血清蛋白质。氨基酸或蛋白质的等电点离缓冲液的pH值越远，带电越多，电泳速度越快，反之电泳速度越慢。

离子强度对电泳的影响是：离子强度低，电泳速度快，分离区带不易清晰；离子强度高，电泳速度慢，区带分离清晰。如果离子强度太高，蛋白质的电荷会减少（双电层压缩），电泳速度会变慢。因此，常用的离子强度在0.020.2之间。

（四）支持媒体

对支持介质的要求是它应该是一种相对惰性的材料，不会与被分离的样品或缓冲液发生化学反应。此外，还要求具有一定的韧性，不易折断，便于存放。由于各种介质的精确结构对被分离物质的运动速度有很大影响，因此支持介质的选择应取决于被分离物质的类型。

吸附支持介质的表面对被分离的物质有吸附作用，使被分离的物质被保留，电泳速度降低，导致样品拖尾。由于各种物质的吸附力不同，分离的分辨率降低。纸的吸附力比较大，醋酸纤维素薄膜的吸附力很小。

电渗在电场中，液体对固体的相对运动称为电渗（图3-13-8）。它是由缓冲液的水分子和支持介质的表面之间的相关电荷引起的。由于水是极性分子，如果由于滤纸中存在羟基而使滤纸表面带负电，则与滤纸表面接触的水分子将与带正电的滤纸接触极，水分子会向滤纸移动。由于电渗和电泳同时存在，所以电泳过程中被分离物质的电泳速度也受电渗的影响。例如，血清蛋白的低压电泳是在巴比妥缓冲液中pH 8.6、离子强度0.06的条件下进行的。蛋白质的运动方向与水溶液的运动方向相反，有电渗现象，蛋白质游动的距离与电泳的距离相等。距离减去电渗距离，电泳速度减慢。如果两者同向运动，则蛋白质游动距离为两者之和，电泳速度加快。当使用琼脂凝胶作为支持介质时，由于琼脂中含有较多的硫酸根，固体表面带有较多的负电荷，电渗现象更为明显。

在pH 8.6条件下进行电泳时，由于电渗移动距离大于电泳距离，许多球蛋白向负极移动。这种现象成为对流免疫电泳的理论基础。

不带电荷的有色颜料或有色葡聚糖可用于置于支持介质的两端之间。电泳结束后，观察电渗相对于这些物质的移动方向和距离。