在研究神经受体方面的应用


很早就知道神经肌肉传导中有Ach受体,也知道许多抑制这种传导的药物或毒物作用于这种受体,但研究其分离和性质非常困难这样的受体。其原因一方面是它们的含量很低,不易纯化,另一方面与这类受体作用的药物(如箭毒等)亲和力小,特异性不强,这给分离鉴定工作带来了很大的困难。难以克服的困难。事实上,在蛇毒中使用突触后神经毒素之前,对AchR 的研究非常缓慢。眼镜蛇毒和海蛇毒含有大量突触后神经毒素,可与AchR结合,阻止Ach发挥作用。这类毒素,尤其是-银环蛇毒素和-眼镜蛇毒素,与其他AchR抑制剂相比有两个显着特点:一是它对AchR具有非常高的亲和力,而且这种作用力是非共价形式;其次,它对烟酰胺型AchR 结合具有很强的特异性。由于这些特性,它们在AchR的研究中发挥着巨大的作用,表现在以下几个方面。

(1) 作为检测烟酰胺AChR的标志物

银环蛇毒素可以用3H 或1351 进行放射性标记而无需灭活。由于该毒素对AchR具有很高的结合特异性,可用于检测AchR在各种组织中的分布和含量,也可作为AchR纯化过程中的示踪工具。将标记的金环蛇毒素与组织结合,进行放射自显影,可以查出各种组织终板膜上AchR的密度,也可以查明动物发育和切除过程中AchR的产生量和含量变化的影响神经发生对AchR 含量和其他方面的影响。目前已知哺乳动物和蛙类骨骼肌神经中AchR的含量和对乙酰胆碱(Ach)的敏感性均增加,并在切除后15天达到最大值。去神经化的AchR与原来的AchR本质上是一样的,但两者之间还是有很多区别,包括等电点、离子传递活性和免疫力等方面的差异。这种变化可能部分是由于终板后面的膜上磷脂的变化。

(2) AchR的纯化

过去,尝试通过各种方法纯化AchR,包括层析、等电聚焦电泳和亲和层析,但均未成功。虽然AchR 通过以药物为配体的亲和层析得到部分纯化,但仍远未达到纯。银耳毒素的发现解决了这一难题。以金环孢霉毒素为配体的琼脂糖凝胶是最有效的亲和层析工具。该凝胶在0.02%叠氮化钠存在下4'C稳定6个月不变质,极大地促进了AchR的纯化。

(3) 作为研究药物-受体相互作用的工具

除了蛇毒中的突触后神经毒素外,还有很多药物或毒物可以与AchR结合,有的是人工合成的,有的是天然存在的。已知-金环蛇毒素能以强亲和力特异性结合烟酰胺型AchR。竞争结合实验可以了解其他药物或毒物的结合位点是否与«-银环蛇毒素相同,结合力的大小和特异性,为阐明药物或毒物的作用机制奠定基础。现在已知有些物质与AchR和-金环蛇毒素具有相同的结合位点,有些与同一分子的另一个活性位点结合,有时AchR可以同时结合两种活性物质。

(4) 作为研究AchR结构和性质的工具

以-金环蛇毒素为工具,可以对AchR的结合位点、作用机制和结合动力学进行广泛的研究。 N-胆碱受体是第一个结构最清楚的亚型,如果没有高效工具的帮助,这种成功是不可想象的,即标记的-金环蛇毒素,它可以追踪AchR,在确定其分子量方面发挥作用、等电点等。由于AchR的含量不多,不易获得,不能像其他蛋白质性质那样大量使用。由于使用量小,用常规检测方法难以检测,只能使用标记的-金环蛇毒素作为检测工具。

除了上述作用外,突触后神经毒素在重症肌无力的病理学研究和与AchR相关的离子传导泵作用机制研究中也有应用。下面将详细描述这两类问题。

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