蛇毒中磷脂酶B和C

如前所述，所有研究的蛇毒都含有PLA2。也有学者发现，有些蛇毒在沸水浴中加热后，能继续水解溶血卵磷脂，表现出磷脂酶B活性。然而，这种活性是PLA2 的另一种功能还是一种独立的磷脂酶B。目前仍存在争议。

最早发现磷脂酶B 活性的是Do'y 等人。 （1961）。 Doery 和Pearson (1964) 也在澳大利亚蛇毒中发现了这种酶活性。后来，Shiloah 的研究证明，巴勒斯坦毒蛇的毒液中的PLA2 具有水解2 位卵磷脂和1 位溶血卵磷脂的能力。因此，该酶表现出PLA2 和磷脂酶B 活性，后者的活性水解前一反应的产物。从蛇毒中分离出PLA2

卵磷脂水解的最适pH为9.0，在此条件下，磷脂酶B的活性很低。在pH 10.5 时，酶的稳定性增加。溶血素水解的Limeweaver-Burk图呈线性，Km为1.1 mmol/L，Kcat=0.55/S，反应条件为pH10.0，37。相同条件下，若以2-脱氧溶血卵磷脂为底物，则Kcat=0.01/s。以卵磷脂为底物，这些常数在正常情况下无法测量，因为当底物浓度为0.25mmol/L时，卵磷脂(pH9.0)的水解速率约为溶血卵磷脂的1000倍。次（PH10.0）。纯化的PLA2 活性和磷脂酶B 活性的如此大的差异至少部分是由于水性介质中卵磷脂和溶血卵磷脂胶束的物理化学性质的差异造成的。现在已知卵磷脂在10g-Vml（约0.012mmol/L）的低浓度下形成薄层结构，而溶血卵磷脂在104g/ml（约0.16mmol/L）的低浓度下形成规则的球形胶束。因此，胶束的大小和形状可能会影响酶与底物的结合。乙醚能提高PLA2的活性，抑制磷脂酶B的活性，也表明水解速率的差异与底物的理化性质有关。因为卵磷脂是醚溶性的，而溶血卵磷脂则不是。这些证据表明，上面发现的磷脂酶B 活性是PLA2 本身双重作用的结果。

最近，Bernheimer 等人。 (1986)从澳大利亚铜头蛇和克勒提蛇(蛇的毒液)的毒液中部分纯化了磷脂酶B，从而最终证实了蛇毒中磷脂酶B的存在。与磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰丝氨酸是底物。该酶具有磷脂酶B的活性，但不能水解鞘磷脂。过去对蛇毒的研究很少，只知道毒药对老鼠的致死剂量。 0.48mg/kg，含有4种有毒成分。这两种蛇毒对洗净的兔红细胞有直接溶血作用，这种溶血作用与温度有关。这说明蛇毒成分中可能含有磷脂酶，后来进一步研究发现，这些蛇毒对稀释后的蛋黄有乳化作用，而负责这种作用的成分很可能是磷脂酶B，因为虽然磷脂酶A2具有a 对上述底物的水解作用，水解的结果是底物被去除而不是仅仅被乳化。后来进一步证实，蛋黄的乳化和溶血作用是由磷脂酶B的一种成分进行的。从这两种蛇毒中部分纯化的磷脂酶B溶血红细胞的动力学特征不同于粗毒，即表现在两个方面：一是粗毒的溶血有“冷热”作用，即与温度有关，部分纯化的磷脂酶B影响较小；第二种区别是粗毒浓度降低时，溶血百分率急剧下降，而部分纯化的磷脂酶B作用时，虽然也有剂量相关性，但不如粗毒明显毒。这种现象可能是因为粗毒中含有两种或两种以上作用于红细胞的成分，PLA2就是其中之一。

过去Doery和Pearson(1964)测定了10种蛇毒中磷脂酶B的活性，发现澳大利亚铜头蛇和Yiao蛇的毒液中有这种酶的活性，但他们使用的条件是PH9。 5.他们还指出，磷脂酶B 的活性只能在pH 8.0 以上测量。在如此高的pH条件下，PLA2的活性受到抑制，所以可能是PLA2的另一种活性引起的。 Bemheimer 等人使用的条件。在生理pH6.8 时，显示出磷脂酶B 活性，表明该酶可能确实独立存在于蛇毒中。伯恩海默等人。 (1987) 向Coleti 的澳大利亚蛇学习

磷脂酶B是从蛇毒中彻底纯化出来的，这无疑解释了这种酶的存在。凝胶过滤法测定分子量为35000，SDS-PAGE测定分子量为16500，认为该酶以二聚体形式存在。该酶的等电点为6.2，与从同种蛇毒中纯化的PLA2有明显区别。这种磷脂酶可水解磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺，但对其他测定中使用的磷脂无活性。这种酶与PLA2 相似，因为两者都是热稳定的。在体外对家兔和人的红细胞能产生强烈的溶血作用，但对牛、羊的红细胞无水解作用。磷脂酶B对蛋黄稀释有很强的干扰作用，对培养的横纹肌肉瘤细胞也有细胞毒作用。将这种酶注射到大鼠体内后，这些动物出现了蛋白尿。

笔者认为，蛇毒中部分磷脂酶B的活性是由PLA2的双重作用引起的，尤其是在高pH条件下测定的，更应引起重视，不能武断下结论。这种独立的酶可能确实存在于某些蛇毒中，Bemheimer报道的磷脂酶B可能属于这种情况，但还有待进一步证实。有必要对纯化的酶进行酶促测定，以确定是否存在磷脂酶A2 活性。

蛇毒中是否存在磷脂酶C 的问题也没有定论。 Vidal Breard (1950) 报道了这种酶在Agkistrodon mori (a/) 毒液中的活性； Braganca 和Khandeparkar (1966) 曾指出眼镜蛇毒液中的细胞毒蛋白(a) 可水解-卵磷脂释放磷脂酰胆碱，与磷脂酶C

活动。然而，其他学者尚未在同类眼镜蛇舟山亚种的毒液中检测到这一点。

酶活性。