蛇毒抗原和蛇毒抗体的体内反应

1.中和

蛇毒抗原与相应的抗体在试管中可以发生特异性结合反应，也可以与体内相应的抗体结合而解除其毒性，称为中和作用。蛇毒在体内的中和清除不仅主要由抗体决定，还辅以巨噬细胞、补体等非特异性因素。中和的结果是蛇毒无害。体内蛇毒抗原抗体复合物的消除是一个相对复杂的过程。

由于蛇毒抗体对蛇毒有中和作用，临床上使用相应的抗蛇毒血清治疗蛇咬伤患者，抗蛇毒血清的有效性也可通过蛇毒中和试验来判断。抗蛇毒血清的功效通常以有效剂量的一半表示(ed5.)。 ED5。是一组小鼠在一定量（如SLD5.）蛇毒攻击下存活一半动物所需的最低抗蛇毒血清量。抗蛇毒血清的ED5。它越低，它中和蛇毒的能力就越高。如果某种抗蛇毒血清在使用200^1后仍不能保护一半小鼠免于死亡，则可判定该抗蛇毒血清无效。编辑5。该测定可以在小鼠或组织培养物中进行。现在有人用ELISA等体外试验方法代替体内测定。

(1)小鼠体内蛇毒中和试验

材料：蛇毒SLD5.0.2ml，待测抗蛇毒血清，小白鼠（健康，雄性）18g~22g。

方法：

抗蛇毒血清试验剂量：按200/^112.5M1按比例递增确定5个剂量组。

取小鼠30只，随机分为5组，每组6只。每组小鼠皮下注射0.2ml无菌生理盐水配制的5LD5。蛇毒，然后每组每只小鼠按抗蛇毒血清的剂量从尾静脉快速注射（总液量200M1）。每组单独饲养，观察24小时，记录死亡率。根据各组试验结果，采用概率单位法计算抗蛇毒血清的中和试验半数有效剂量（ED5.）和95%置信限。

计算：实例测试结果如下表所示：

表3-16-8 抗蛇毒血清ED5Jij测定结果

剂量； xl/鼠标

对数剂量(x)

动物数量（只）

死亡人数（仅）

死亡率（）

概率单位b)

体重（wo

200

2.3010

6个

0

0

2.76

1.44

100

2.00

6个

1个

16.67

4.03

5.32

50

1.6989

6个

3个

50.00

5.00

6.37

25

1.3979

6

4

66. 67

5.43

5. 95

12.5

1.0969

6

5

83. 33

5. 96

4. 81

 

 

 

(二）组织培养法中和试验

蛇毒的出血毒素对某些组织培养物有明显的致细胞病变作用，而且要比对小鼠的致 病变能力要敏感100倍以上，因此，可以用组织培养法进行蛇毒的出血毒素中和试验检查 抗蛇毒血清和蛇药的ED50 .1962年Gaertner等应用鸡胚、鼠胚及人肾、猴肾KB细胞株等 组织培养物对各种不同蛇毒的易感性进行了研究。1976年李栋梁等用组织培养法筛选抗 蛇毒的中草药的研究，其结果与小白鼠法和临床应用效果基本一致。该法除比较敏感外， 不需用动物，可避免小鼠的个体差异，又可节省人力和经费，是值得进一步研究和应用的 方法。组织培养法蛇毒中和试验的主要缺点是对神经毒素不敏感，神经毒素不能用此法进 行中和试验，混合性毒素也不宜用此法。另外，它还要求有组织培养的设备条件。该法目 前尚很少被采用。

实验方法和原理:组织培养法蛇毒中和试验的原理和方法基本上同病毒的中和试验。 其基本过程是：

先将被检抗蛇毒血清(或其他抗蛇毒药物）与不同量的已知蛇毒（主要是出血毒 素)在试管中混合，使一定量的蛇毒被中和。

再将其混和物接种于细胞培养管内，培养一定时间，观察各组织培养管的细胞病 变效应情况，记录各剂量组发生细胞病变的管数。

用Read-Muench法计算出半数组织培养管感染量(TCID5。），即能使50%细胞出 现细胞病变效应的蛇毒较大稀释度以及中和指数(对照组与实验组LDm差数的反对数）。

二、变态反应

临床上应用抗蛇毒血清治疗毒蛇咬伤。抗蛇毒血清主要是马血清制剂(少数为羊、兔 血清制剂），对人体来说是异种高分子的蛋白质，具有很强的抗原性，因此，注射抗蛇毒血 清可以发生变态(超敏)反应。这种反应主要表现是          第I型变态反应(过敏反应)和          第m型 变态反应(抗原抗体复合物型反应）。

这些变态反应的发生是由于马抗蛇毒血清(马血清)抗原进入人体后与其相应的抗马 血清的抗体特异性结合，而导致的生理功能的障碍或病理性损伤。它的本质是体内病理性 的抗原抗体反应。

(一）抗蛇毒血清的       

此型变态反应简单的发生机制是:抗蛇毒马血清(抗原)进入过敏体质的人体后，刺激 机体产生亲细胞性IgE抗体。IgE即以Fc段结合到组织中的肥大细胞或血流中的嗜碱性 粒细胞表面上，此时机体处于致敏状态，即被致敏。当马血清(抗蛇毒血清)再次进入机体 时，即与结合在肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的IgE发生特异性结合，一个分子的马血清 最少结合2个IgE,使IgE形成一种“搭桥”状态，致使其Fc段发生了构形的改变，而导致 了靶细胞(肥大细胞、嗜碱性粒细胞)胞内酶的激活，引起细胞内嗜碱性颗粒的脱出，释放 组织胺、白三烯、嗜碱性粒细胞趋化因子和血小板激活因子等生物活性物质，作用于相应 的效应器官。另外，马血清与其相应抗体IgE结合也能使血浆《2球蛋白形成激肽，使胆碱 能神经的兴奋性增加，释放乙酰胆碱。以上这些生物活性物质能引起支气管等平滑肌的收 缩，毛细管扩张和通透性增加，腺体分泌增加，即出现了          第I型变态反应。

抗蛇毒血清的肌肉注射，尤其是静脉注射易发生第I型过敏反应。这一型反应因发生 的时间不同，大体上表现为三种情况:          第一种是速发型过敏反应或称血清过敏性休克，一 般在肌肉注射后2h时内发生，快的可在注射后几分钟内发生(尤其是静脉注射）。主要表 现为低血压，或循环衰竭，或伴有喉头水肿等气流阻塞。如不能及时抢救，可造成死亡。 第 二种是延缓型过敏反应，通常在注射抗蛇毒血清24h内发生。如皮肤荨麻疹、恶心、呕吐、 上腹部不适、发热等症状，一般不太严重，为早期轻度反应。第三种是在马血清注射24h以 后所发生的过敏反应。一般症状多轻微，仅表现为荨麻疹或轻微不适。

          第I型变态反应有明显的个体差异，而且反应的轻重也不尽相同，因此在注射之前必 须做皮肤过敏反应或者进行脱敏注射，也可采取分段稀释滴注法。如病人有注射马血清过 敏史者，更应慎用，防止过敏性休克发生。

(二）抗蛇毒血清

这型反应主要是初次大量一次肌肉注射抗蛇毒血清引起的。有些人在注射抗蛇毒马 血清7天〜14天后，机体产生了抗马血清的抗体，主要是IgG，也可以是IgM。此抗体与体 内尚未排出的马血清抗原结合形成可溶性抗原-抗体复合物，一方面可以引起血小板和 嗜碱性粒细胞释放血管活性胺(组织胺、5-羟色胺等），使血管通透性增加，也导致免疫复 合物的沉着;另一方面可溶性抗原抗体复合物沉积在血管基底膜等处后，激活补体产生趋 化因子(C3a，C5a, Cm),吸引中性粒细胞到局部，在吞噬抗原抗体复合物中释放出溶酶体 酶，因而，损伤血管和邻近组织，造成血管炎性的变化。在临床主要表现有发热、皮肤荨麻 疹、淋巴结肿大、关节肿痛、蛋白尿等症状。如果静脉注射抗蛇毒马血清，所形成的免疫复 合物长时间不能排出体外，或者注射低亲和力的抗蛇毒血清也可以产生类似血清病样的 全身性的免疫复合物病(          第M型变态反应）。