蛇毒中作用于糖基化合物的酶

1.透明质酸酶

透明质酸酶是一种作用于动物组织粘多糖糖苷键的酶，可水解动物组织中的透明质酸、硫酸软骨素A、C。这种酶广泛存在于哺乳动物的睾丸、水蛭的头部、许多传染性细菌、蛇毒、蜂毒、蝎毒、蜘蛛毒和毒鱼中。它能通过水解组织中的酸性粘多糖来辅助毒素的扩散，因此也被称为“扩散因子”。在几乎所有研究过的蛇毒中都发现了这种酶，在响尾蛇和毒蛇的毒液中含量更高。与从睾丸中提取的透明质酸酶一样，蛇毒中的透明质酸酶是一种标准的内切-N-乙酰己糖胺酶。己糖胺与氧桥之间的键被水解，主要产物是一个四糖单元（Glc-UA-Glc-NAc）。与睾丸中的透明质酸酶一样，其作用可被糖苷转移酶加强。

对透明质酸酶的认识是有一个过程的。首次发现哺乳动物睾丸含有一种水溶性物质，可增强注射液在组织中的扩散。在蛇和蜘蛛毒液中也发现了类似的效果。 Fav_illi 等人。 (1940) 指出，这些毒物对粘多糖有很强的水解作用，可被抗蛇毒血清抑制。麦克莱恩等人。 (1941)发现蝰蛇毒与透明质酸酶作用可释放N-乙酰己糖胺，伴随己糖胺的释放，底物粘度降低。迄今为止，自然界中的透明质酸酶只是被发现而已。

邱等。等(1960)测定了六种蛇毒的透明质酸酶活性，发现从眼镜蛇舟山亚种(W.na-amz)的毒液中部分纯化的透明质酸酶没有毒性。来自眼镜蛇里海外亚种n.orb-arnz 毒液的透明质酸酶也与毒性无关。穆罕默德等人。 (1969, 1973) 测量了几种埃及蛇毒中的透明质酸酶。其中，埃及眼镜蛇蛇毒中的透明质酸酶对热敏感，可被2,5-二羟基苯甲酸钠抑制，而EDTA对其无作用。这类似于从睾丸中纯化的透明质酸酶。不同来源的透明质酸酶的最适pH大致相同。该酶在蛇毒中的最适pH为4.6，超过6.5酶活性明显下降。从美丽的长矛头蛇和可怕的响尾蛇毒液中分离出的酶的最适pH为5.5至7.0，当粗毒液加热至70并孵育30分钟时，酶的活性完全消失。从蛇毒中分离出的酶也对热敏感，它可以被2,5-二羟基苯甲酸钠部分抑制，但不能被EDTA 抑制。透明质酸酶可以水解透明质酸、硫酸软骨素A或C，但不能水解肝素，这些性质与睾丸中的透明质酸酶相似。透明质酸酶不仅在酸性范围内（3.5-5.0）具有最适pH值，而且在酸性环境中稳定，在中性或碱性条件下迅速失活。一定浓度的NaCl可增加酶的稳定性，酶稀溶液在含0.4mol/L NaCl(pH6.4)的磷酸盐缓冲液中4放置2个月仅略有下降。透明质酸酶的热稳定性差异很大，有的可以在室温下数日保持活性不变，有的透明质酸酶在41：时迅速失去活性。在60C 时，从埃及眼镜蛇、绿曼巴蛇、加布尼亚丝蜂和毒蜂的毒液中分离出的酶迅速失去活性。从蛇毒中分离出的酶也对热敏感，常温下易失活，4保存2周酶活性丧失15%。

尽管许多学者对透明质酸酶的纯化进行了研究，但真正获得纯品的是徐迅等人。中国科学技术大学等(1983)以蕲蛇毒液为原料，得到低pH体系聚丙烯酰胺凝胶电泳。该区纯透明质酸酶经糖染法证实为糖蛋白，分子量约为30000，等电点为10.3。在分子量方面，与其他来源的透明质酸酶相比，蛇毒中的透明质酸酶的分子量最小。已知中国东亚蝎毒液中透明质酸酶的分子量为54000，牛睾丸中酶的分子量为61000，蜂毒中酶的分子量为63000，细菌中酶的分子量为150000。从等电点来看，所有动物毒物中的透明质酸酶都是碱性的，不同于睾丸透明质酸酶（酸性蛋白）和细菌透明质酸酶（中性蛋白）。

Pukrittayakamee 等人。 (1988)测量了南部非洲毒蛇毒液的透明质酸酶活性，发现除马来环蛇外，眼镜蛇毒液中的酶活性很弱或没有这种酶活性，而蝰蛇毒液中的酶活性酶的含量更高。从蛇毒中分离出的一种透明质酸酶，分子量为14000，对热敏感，贮存可变。

一般来说，透明质酸酶对动物没有直接毒性，但它能破坏结缔组织，使其他有毒物质迅速进入机体，因此透明质酸酶具有增强毒性的作用，已得到普遍认可。

2.乙酰肝素酶

肝素（硫酸软骨素B）以其强大的抗凝血作用着称，它与血液中的抗凝血酶I相互作用而具有强大的抗凝血作用。各种能促进凝血的响尾蛇毒和不同种类的蕲蛇毒都含有肝素水解酶，能水解以肝素为底物的糖苷键。这种称为乙酰肝素酶的酶不同于透明质酸酶，因为肝素不水解肝素，而是抑制其活性。德维等人。 (1970)研究了这种酶，发现蛇毒中乙酰肝素酶水解多糖的特异性不同于其他来源的乙酰肝素酶。这种酶似乎对热有一定的稳定性，其他特性也是已知的。不多。