蛇毒中不同来源NGF的比较

(―)部门内比较

据现有资料，眼镜蛇科蛇毒中NGF的分子量均在25000左右，均由两条相似或相同的多肽链组成，等电点在6.710.0之间，糖分含量不高。很多。在眼镜蛇毒中，只有绿曼巴蛇（pzWcfc）蛇毒NGF的分子量相对较大，约为34,000。

许多响尾蛇毒液NGF 以二聚体的形式存在。如金刚毒蛇、黑响尾蛇、金腰蛇毒、热毒蛇毒和稀有蛇毒中的NGF，多以二聚体形式存在，如以聚集态存在，分子量可在4000050000之间。它以单体形式存在，分子量约为25,000。从A.rAo中纯化出毒蛇毒NGF的文献不多，主要资料来源于对蛇毒NGF和两种蛇毒NGF的研究。这两种蛇毒NGF的分子量约为35000，属于糖蛋白。

(2) 科目间比较

用抗蛇毒NGF血清和其他蛇毒NGF进行双向免疫扩散试验，发现该抗血清与蛇毒NGF有交叉反应，但所需NGF浓度远高于my'a蛇毒.如果先将抗血清与其他蛇毒NGF孵育，再加入到体外培养的神经节培养基中，发现NGF活性下降较少（6%），而蛇毒NGF活性下降约12% %。虽然交叉反应不是很强，但大于大鼠额下腺NGF对m NGF血清的反应，只有1%的交叉反应，两种NGF的氨基酸序列有65%的同源性。贝利等人。 (1976)也做过类似的试验，证实了以上结果，有点不同的是他的实验结果交叉反应比较大，在5%到50%之间，大部分NGF和抗血清有20%~25%的交叉反应性。

从以上实验可以看出，虽然蛇毒NGF的抗原性在不同科甚至同科不同物种之间存在一定的差异，但蛇毒NGF总体上是同源的。蛇毒NGF根据分子量和糖含量可分为两大类：一类是从Agkistrodonpiscivorus、C.adamanteus、Bothropsjararaca、N.naja和蛇毒中分离得到的NGF。它们的分子量约为25,000。相似或相同的亚基组成，每个亚基的分子量约为13000，无糖或含糖量极低，小鼠额下腺NGF的B亚基也属于此类。第二类是rhodostoma、V.ammodytesammodytes和V.russellisi（另一种——实验室研究成果）蛇毒

分离出的NGF分子量较大，含有10%20%的碳水化合物。有些以二聚体的形式存在，有些则以不明确的方式存在。如果除去第二类NGF的碳水化合物，其分子量与第一类NGF相似，这表明两种NGF的主要区别可能在于糖链。需要注意的是，目前分离出来的所谓含糖NGF实际上还不是纯的。有学者在分析部分纯化的NGF时发现NGF含有糖分，而在分析真正纯化的NGF时却发现不含糖分。此外，关于蛇毒NGF的报道有两份，一份含糖，一份不含糖，也应引起重视。也许脊椎动物中只有一种无糖的NGF，而有报道称含糖的NGF可能是样本污染的结果。

(3) 蛇毒NGF与小鼠NGF的比较

大鼠额下腺NGF是一种含有、和73个亚基的大分子化合物，沉降系数为7S，其中亚基可直接从腺体匀浆中分离出来，具有生物活性。 亚基含有两条相同的肽链，每条肽链含有118个氨基酸残基，其氨基酸序列已确定。 iV.my'a蛇毒中NGF的部分序列也已确定，其与小鼠NGF相应部分的同源性高达64%，如图3-12-2所示。

蛋白质一级结构的同源性解释了基因的同源性。有趣的是，已知蛇毒、小鼠NGF和胰岛素前体蛋白在一级结构上也很相似，有20%的氨基酸相同，这说明蛇毒NGF、小鼠NGF和胰岛素前体蛋白是从一个共同的祖先进化而来的.不同NGF（如NGF和小鼠NGF）之间的差异小于NGF和胰岛素前体蛋白之间的差异，这表明这两类蛋白质很早就从一个共同的祖先中分离出来，但都保留了共同的固有结构。小鼠NGF和蛇毒NGF的三维结构知之甚少，但有证据表明它们的三维结构相似。对小鼠NGF的研究发现，它含有三个Try残基，一个位于分子表面，一个埋藏在分子内部，另一个部分暴露在外。 n-蛇毒NGF中含有4个Try残基，它们对维持NGF的生物活性起着重要作用，它们都可以被N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）氧化，说明这些残基位于分子表面。两种NGF用NBS滴定，发现滴定曲线相似。可能是Myamya蛇毒NGF的Try分布与大鼠额下腺NGF相似。 my'a蛇毒中的NGF不能与小鼠NGF的a或7亚基形成复合物。然而，p 亚基可以与

用抗鼠NGF血清在体外与蛇毒NGF作用，发现它可以部分抑制和蛇毒中 NGF 的活性，抑制率分别为6%、6%、12%和12%。如果用抗n— NGF血清在体外与鼠NGF作用,抗血清 只能抑制活性的1%。尽管如此，这两种来源的NGF同源性还是明显的。蛇毒NGF和鼠 NGF之间的同源关系还可以从两类动物的分泌器官相似性看出。蛇的毒腺实际上是一种高度进化的腮腺。腺体的后部是主要分泌部位，分泌管上皮细胞含有7颗粒，这种颗粒的 大小、密度和分布都和雄鼠额下腺卷曲管上皮细胞内的颗粒相似。二者的腺体不但含有起 消化和水解作用的酶，而且都有毒性。鼠额下腺可能是哺乳动物中惟一分泌毒物的腺体。