蛇毒类毒素制备方法

蛇毒的解毒方法有甲醛法、戊二醛法、二氢硫辛酸法、谷胱甘肽法、亚甲蓝法、依地酸法和7射线照射法等，但与甲醛法相对稳定，免疫原性较好。下面介绍几种常用的蛇毒类毒素制备方法。

(1)渐量甲醛解毒法

先用33.3mol/L磷酸盐缓冲液将蛇毒（或纯化蛇毒或粗蛇毒）制成浓度为1%，然后在第1、3、5、7天分别加入0.2%的甲醛（V/V )，最终甲醛含量为0.8%(V/V)，在培养箱中进行脱毒。 10天后，每天取出注射的小鼠进行毒性检查，直至完全解毒。加入0.01%硫柳汞（W/V），用50倍无菌生理盐水于4冰箱透析2天3天，除菌过滤后进行LF、氮含量、甲醛浓度测定和无菌检验。然后根据氮含量稀释至所需浓度（含蛋白质3mg/ml），加入吸附剂磷酸铝使之为1.3mg/ml。组成0.01% 硫柳汞(W/V)，并装入安瓿瓶中。管理检验和无菌检验合格为成品，4保存备用。

(2)初级甲醛解毒法

用新鲜配制的无菌0.2%（W/V）甲醛和PBS（66.7mol/L，pH 7.0）解毒，无菌操作配制2mg/ml（W/V）蛇毒溶液（如蕲蛇毒液），置37解毒，7天后每天检查解毒情况，直至完全解毒。加入0.01%硫柳汞（W/V），在无菌操作下用50倍以上无菌生理盐水4透析48小时，进行LF、氮含量、甲醛浓度测定和无菌检验。

吸附剂吸附采用磷酸铝吸附使浓度为1%1.5%，加入0.01%硫柳汞（W/V），摇匀。无菌操作下的分包装、瓶封和标签。理化性质抽样和无菌检验。也可以在弱酸或弱碱或中性环境下，在10mg/ml蛇毒生理盐水中加入0.2%甲醛（W/V）解毒，然后用无菌生理盐水稀释至2mg/ml浓度，并使用铝盐吸附而成。检验合格后为吸附甲醛蛇毒类毒素，保存于4X：冰箱中备用。

(3)低温乙醇提纯甲醛解毒法

用无菌pH 7.0、16.7mol/L磷酸盐缓冲液配制蛇毒（如黄绿色铁头蛇毒）浓度为1%，-1CTC加纯酒精使终浓度为30%，置于-3CTC中5h，最后于-10以1000 Or/min离心30min，将沉淀重悬于pH 7.0的PBS中，分4次加入甲醛使终浓度为1 %。脱毒后用无菌生理盐水透析，灭菌过滤，加入防腐剂，用磷酸铝（1.35mg/ml）吸收，使终蛋白含量为1mg/ml，化学合格即为低温乙醇甲醛解毒类毒素的纯化及微生物试验。

(4)戊二醛解毒法

用25% 戊二醛解毒。在pH7.0缓冲盐水溶液的蛇毒溶液中，加入戊二醛，使其含量为2.510T3mol/L，蛇毒(如眼镜蛇毒)蛋白质含量为1mg/ml的浓度，放置20 TC18h24h( 更多90%以上的毒性被去除），加入赖氨酸终止反应。杀菌过滤后，加入吸附剂进行吸附，再加入防腐剂，分装，检测合格后，即吸附戊二醛蛇毒类毒素。

(5)二氢硫辛酸解毒法

新鲜配制25mg/ml蛇毒（如黄绿色铁头蛇毒）生理盐水，300r/min离心10min，上清液除菌过滤，无菌试验确认无菌，分装小瓶50mg/2ml，冻干。每瓶干毒素加入10ml无菌的0.5%二氢硫辛酸溶液，溶解后置于37Clh解毒，此时为乳白色溶液，pH值为7.2。添加防腐剂后，经无菌、安全和理化检验，为二氢硫辛酸蛇毒类毒素。也可加入吸附剂使二氢硫辛酸吸附蛇毒类毒素。

(6) 7射线照射解毒法

用100KR 7射线照射蝰蛇毒，可使其解毒并保留其抗原性，成为毒液类毒素。