蛇毒心脏毒素的鉴定

心脏毒素主要存在于眼镜蛇科的眼镜蛇毒、金环蛇毒和响尾蛇毒中。在动物实验中可见，心脏毒素选择性作用于心脏，使心脏在短暂的兴奋后转为抑制，最终在跳动的收缩期使心脏停止，最终引起犬、猫的心室颤动。和其他动物。当心肌毒素作用于心肌而使心脏停止跳动时，即使用生理盐水反复冲洗也难以恢复跳动。心脏毒素通过直接损伤心肌起作用。实验证明，心肌毒素是一种多肽类毒素，特异性作用于心肌细胞，引起心肌细胞膜结构的改变，使部分膜受到磷酸酶的攻击。因此，心脏毒素可以直接作用于心肌，也可以降低血压，引起持久的收缩期收缩。心脏毒素的作用可以被钾离子逆转。

心脏毒素的毒性远小于神经毒素。例如，眼镜蛇心脏毒素对小鼠腹腔注射致死强度仅为神经毒素的1/20，对猫静脉注射其致死强度也不及神经毒素的一半。关于。

可以使用离体器官法或整个动物法来鉴定心脏毒素。例如在离体蛙心脏灌注法中，可以观察到心脏在短暂的兴奋后转为抑制，最后在收缩期心跳停止。将猫作为一个整体进行实验时，收缩压降低，心电图异常改变：P-R间期延长，QRS波幅降低，S-T段和T波改变，室性早搏，

完全A-V 阻滞和心室节律。这是因为心脏毒素能不可逆地使心肌细胞膜去极化，最终损害脏器功能，因此其毒理作用十分广泛。

(―)心血管效应的测定

整个实验：只大鼠采用20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）腹腔麻醉，右颈总动脉逆行插管至左心室。 (LVESP)，较大的左心室压力上升和下降速率( LVdp/dtmax)；通过股动脉插管记录血压，同时通过记录心电图测量心率（HR）。稳定20分钟后，将样品注入股静脉，观察心功能变化。

体外实验：只大鼠用氨基甲酸乙酯麻醉，股静脉注射0.2ml 0.3%肝素。开胸迅速获得心脏，挂在Langendorff灌注装置上，从主动脉逆行灌注95% O2和5% C02平衡的Krebs。 -Henseleit 溶液（K-H 溶液），灌注速率6ml/min。通过主动脉导管和左心室导管，通过换能器在生理多导体上监测LVESPLVdp/du^、HR 和主动脉灌注压（PP）。预灌注15分钟后，将样品加入液体灌注液中，观察灌注前后的变化。

(2) 大鼠尾动脉插管植入及血压、心率记录

大鼠用戊巴比妥钠（30mg/kg.p）麻醉，沿尾基部腹心向后切开约7cm，分离中央尾动脉，插入聚乙烯套管（外径0.6mm），并结扎并固定它。在插管中保留0.2ml 的1% 肝素以防止凝血。将套管末端密封埋入大鼠尾部皮下，缝合切口，次日使用。术后24小时将完全清醒的大鼠固定在塑料笼中。用普鲁卡因浸润尾部切口后，取出动脉插管，连接插入的血压传感器，并用自动平衡记录仪记录。同时用心电图仪记录大鼠的心率。血压和心率基础值分别为14.270.53kPa（1074mmHg）和48823次/分。

(3) 兔耳动脉插管植入及血压记录

用普鲁卡因浸润兔耳中央动脉周围皮肤，切开皮肤，分离耳中央动脉，插入聚乙烯套管（外径0.6mm），结扎固定，留1%肝素0.2ml于管内以防凝固，备用。术后30分钟，将耳中央动脉插管的一端接入插入式血压传感器，用自动平衡记录仪记录血压。血压基本值为11.20.4kPa（843mmHg）。

(4) 鸡胚心肌细胞培养

培养的鸡胚心肌细胞的搏动观察参照李连达(1980)建立的培养方法进行。这种方法是确定蛇毒中心脏毒素强度的好方法。鸡胚心肌细胞在含2mol/LCa-Cl浓度的细胞培养液中培养3天至5天，选取2簇至3簇正常搏动节律（即40次/分至80次节律）的细胞因子稳定的跳动频率）。次/分），置于倒置显微镜恒温装置中，观察有无心脏毒素，每5分钟或10分钟测量每分钟搏动次数、节律、强度和形态变化。绘制了从3 次观察中获得的实验数据的平均值。