平菇的孢子分离与菌种复壮技术

一般来说，同种的平菇经过4年以上的栽培，都会或多或少出现退化现象。如挂果晚、生长弱、潮汐变化慢、产量低等。平菇的有性繁殖是解决物种退化的有效途径。由于平菇子实体孢子喷出量大，接种操作相对简单，在栽培者中推广孢子分离纯化复壮技术是可行的。母种孢子的分离与接种1、采菇选择形状好、生长势强、能代表品种特征、接近成熟的平菇子实体，采摘一两团作为种菇进行分离复壮并将它们带回室内以备后用。要求采收的子实体菌盖边缘略卷或近乎平整（编者按：一般来说，从组织中分离出来的子实体7、8年即可成熟；而分离出的孢子应成熟，否则孢子无法排出）。 2、装置及灭菌用0.2%溴洁尔胺清洗三个1000ml烧杯和三个培养皿，擦干水分，将培养皿放入烧杯底部。将上层或中层菌盖长7-9厘米的平菇子实体切下，用脱脂棉蘸75%酒精轻轻擦拭菌盖和菌柄，将菌鳃向下放入培养皿中烧杯？最好有蘑菇丝架。此操作完成后，用4层用无菌水润湿的纱布盖住烧杯口的边缘，再盖上一层白纸，用橡皮筋扎口，依此类推，放入接种箱连同3个经过类似处理的烧杯。另取30-40 PDA试管培养基、接种铲、镊子酒精灯等工具放入接种箱内，加入甲醛10毫升、高锰酸钾6克混匀，对接种箱进行熏蒸消毒。 3、接种培养将平菇放入接种箱中进行孢子分离。 8-12 小时后，孢子会弹出。一般经过一天一夜后，培养皿中会出现一层厚厚的白色孢子印。此时应及时进行接种。接种时，双手用75%酒精擦洗后即可进行。先取下盖在烧杯口的纸和纱布，然后用镊子夹住平菇体，取出培养皿用左手的食指和拇指夹住盘体，然后取试管培养基，用左手的小指和无名指夹住。右手持接种铲，在酒精灯上垂直燃烧，进行干热灭菌。待冷却后，用右手小指和鱼际拉出试管棉条，用接种铲从培养皿中央挖出部分孢子接在试管培养基中央。然后放上卫生棉条。一个菇体喷出的孢子量，可接种10多个试管菌种。接种完成后贴上标签，放入25左右的培养箱中培养。培养过程中，前3-4天为孢子定植期，外观无变化。一周后，孢子开始发芽并在其周围长出白色蓬松的菌丝体。菌丝体在大约16-18 天后被培养基覆盖。即纯菌丝体。如有污染管应及时丢弃。原种扩充选择10个菌丝白色、强壮、生长整齐的试管种进行原种扩充。其余20株纯菌丝母种在结果试验完成后用于育苗及相关处理。一支试管可接5瓶原种，每支试管必须先用火焰干热灭菌，再扩充另一支试管。接种后取出菌瓶，放入25左右的培养箱中培养。出菇试验在瓶内菌丝长满后10天左右进行。蘑菇出菇试验采用传统的木片或棉壳培养基进行袋栽培。一般接种10-20袋即可。接种后，在适宜的温度下使菌体发育，菌丝长满后移至出菇最佳条件进行观察。并选择菌丝生长快、取食能力强、结果早、花形好、潮汐变化快、产量高、组织分离质量好的平菇袋上的子实体，再择优生产品种。为什么我们仍然需要分离组织？这是因为孢子分离得到的母种中含有未经质壁分离的单核菌丝，单核菌丝不能结实，因此孢子分离得到的母种不能直接用于生产。