菌株分母种、原始种和栽培种。通常也称为一等种、二等种、三等种。栽培方法不同,下面介绍技术要点。母种培养基的制备通常使用马铃薯琼脂培养基。准备1000毫升培养基,用土豆200克,琼脂18-20克,葡萄糖20克。
做法: 先将土豆洗净去皮,蚕豆切成小块,放入1000毫升水中煮30分钟,用6-8层纱布过滤,补去失去的水分。加入琼脂溶解后,加入溶解的糖,加水至1000ml。然后分装试管,每管含1/5-1/4,加棉塞和包纸。 1.2公斤压力杀菌30分钟,趁热放在斜坡上。冷却后置于25-27,观察无菌后接种。一个母种可以转移25-30 个试管。
将无菌操作接种的试管在25左右恒温培养,约半个月菌丝即可覆盖试管。培养过程中应注意清除被细菌污染的试管。将培养的母种转移到冰箱中,4保存半年,或室温保存三个月。
2、种子培育的原料可以是木屑或棉籽壳。木屑培养基配方: 木屑78%,麦麸或米糠20%,白糖1%,石膏1%。棉籽壳培养基配方:用50公斤棉籽壳加3%的马铃薯浸汁(1.5公斤马铃薯切成泥煮30分钟为滤液),白糖0.1%,硫酸镁0.1%。
方法:培养料与水混合均匀,湿度用手捏紧,指间可见水滴,不滴落。一般料水比为1:1.2-1.3。然后装瓶。装瓶方法是边灌边轻轻摇晃瓶子,使瓶身上下紧实适中,灌至瓶肩压扁物料,洗净瓶内外培养物口,加棉塞和包纸捆扎好放入高压灭菌器中灭菌,1.5公斤压力灭菌一小时。冷却后,在无菌条件下接种。将试管中的母种放入瓶中,一个母种可接4-5瓶原种。接种后于25恒温放置1个月左右,菌丝可盖满瓶身,即为原种。
3、品种培育:个品种的培育实际上是对原有品种的扩充。栽培种木屑培养基配方与原种相同。棉籽壳培养基的配方也与原种相同。装瓶后灭菌,在无菌条件下将原菌装入栽培瓶中。一瓶750ml原种可接80-100瓶栽培种。接种后置于25恒温条件下孵育1个月左右,待瓶满后播种。培养原种、栽培品种时,接种后2-3天检查一次,待菌丝覆盖材料表面后每周检查一次。挑出被杂菌污染的菌种,弃于培养室外。