银耳菌种的制作

母种和原种的制作分离纯化银耳菌丝体和香灰菌丝体，分别在试管中培养（详细分离方法参见文章：银耳菌种分离技术）。生产母种时，先将银耳菌丝取出，膨大至所需管数。然后置于25培养至银耳菌落直径1cm左右。此时，在每个装有银耳菌丝体的试管中，接种极少量的香灰菌丝体，待两者长成一起，即可出售或用于原种生产。如果先连接香灰菌丝，由于香灰菌丝生长快，很快就会覆盖坡面，很快消耗养分，之后连接的银耳菌丝就不容易长出来了。如果在试管中同时接种香灰菌丝和银耳菌丝，会出现银耳菌丝少，香灰菌丝多的缺陷。因此，在生产银耳母种（试管种）时，一定要注意接种顺序，控制好两者的比例。制作银耳菌种，需要了解银耳与其“伴生菌”香灰菌丝体的关系：在可人工栽培的食用菌和药用菌中，只有银耳和金木耳属于此类菌类.它们子实体的形成，除了纯银耳菌丝外，银耳还必须有“伴生菌”的帮助，即灰耳；金穗除了纯正的金穗菌丝外，还必须有坚硬的革质菌的帮助，两者缺一不可。在正常情况下，银耳和金木耳的纯菌丝体生长非常缓慢，分解木质素和纤维素的能力极弱。养分，否则不可能形成子实体。因此，在繁殖银耳和金穗品种时，必须将两种相应的菌丝嫁接在同一培养基上进行混合培养。现以银耳为例，介绍两种菌丝混种生产技术： 1、斜母种混接法取纯银耳菌丝试管母种和新配制的PDA斜试管各一支，分别放入接种室连同接种器（盒），按无菌操作进行转移，即用培养基挑取米粒大小的菌体，转移到空白试管的斜面培养基中，加棉球塞，然后置于22-24恒温培养6-8天。待银耳菌丝长到绣球花黄豆大小时，连同香灰母种移入接种室（箱），用接种铲置于距银耳2厘米左右处根据无菌操作纯菌丝体。小块香灰菌丝母种，培养2天后接种块上可见白色菌丝，7天左右形成白色毛球覆盖银耳纯菌丝球，表面可见白色毛球12-15天后白色毛球顶部有红色和黄色水珠，表示成功。需要指出的是，用斜面银耳和白蜡木耳混合母种扩原种时，应将斜面前后两端切掉，只留绣球形银耳。转移应使用菌丝体和附近的黑灰色香灰菌丝体。因此，一个斜雌种子只能接收一瓶原始种子。 2、如果没有纯银耳菌丝体，培养银耳孢子，产生孢子母种，然后插入瓶装木屑制成的灰耳母种培养基中，混合培养。根据接种要求，按1个香灰斜母种扩12-15瓶木片培养基的比例，放入香灰菌母种、灭菌瓶装木片培养基的试管中，将接种用具一起放入接种盒中，按无菌操作，用接种铲挑取黄豆大小的白蜡菇母种一块，插入木屑培养基瓶中。接种完毕，移至24-26培养，约2天后，接种块上可见白色菌丝萌发。之后要隔天检查，发现有细菌要及时发现并消灭。一般经过11天左右的培养，香灰的菌丝可伸入培养基3厘米左右。此时培养基表面可见灰褐色或深褐色分泌物，说明香灰菌丝生长旺盛，应及时插入银耳。芽孢杆菌属。按照1:12-15的比例，取银耳孢子母种试管和香灰培养木片培养基；一起放入接种室（箱），按无菌操作菌丝体表层用无菌接种刀切香灰，再用无菌接种铲挑取少量银耳孢子，插入香中灰菌丝体。混匀后，将瓶子移至23-25培养，约10天后，可见银耳孢子接种处长出粗大的白色菌丝。

继续培养18天左右，会出现红色和黄色的水珠，再过25天左右，可以看到扭结状的子实体原基，说明培养成功。 1瓶这样的木屑混种可扩展到30-40瓶原种（二次种）。栽培种的产量根据原种的生长情况、果穗基部的大小、银耳菌丝“进食”的深度，决定每瓶原种应扩瓶数.为了保证质量，尽量控制在40-60瓶以内。如果能将原种搅拌均匀，使银耳菌丝和香灰菌丝混合均匀，每瓶原种还可以接100-200瓶种苗。注意事项要生产出优良的银耳菌种，除注意上述无菌操作等要求外，还必须注意以下几个方面： 1.单一性。因此，为了生产出有效的银耳菌种，必须从同一块真菌中获得银耳的纯培养物（包括酵母样分生孢子或银耳菌丝）和纯香灰菌丝体。从不同地区或同一地区的不同耳材（树种）获得的银耳菌丝体和香灰菌丝体不能随意交换和组合。否则，有失败的可能。交换结合的效果要根据银耳菌丝在木屑培养基中的定植情况、果穗基部的大小、切片的开度来判断。凡是能继续生长、形成穗基、顺利开片的银耳菌丝，均可继续膨大用于生产，否则不能使用。 2、接种比例根据银耳菌丝体生长缓慢而香灰菌丝体生长快的特点，在纯混培养中，必须注意银耳菌丝体与香灰菌丝体的接种比例。为了控制两者的接种比例，采用先培养银耳菌丝体，再加入香灰菌丝体的方法最为理想。银耳菌丝的接种比例要达到1000:1一点也不为过（银耳菌丝长到直径1cm左右，里面有上千个菌丝，加几根香灰菌丝就可以了).否则银耳菌丝极少，香灰菌丝占绝对优势，以后就没有或很低的出穗率。如果采用在香灰菌丝体中加入酵母样分生孢子的方法生产菌种，那么银耳酵母样分生孢子的数量是非常多的，每毫升培养液中银耳酵母样分生孢子的数量高达10亿-100亿。在香灰菌丝体生长的木屑培养基中加入酵母样分生孢子液

　　3.　培养条件

　　银耳纯菌种（酵母状分生孢子或银耳菌丝）的培养条件和银耳原种、种植种（混合培养）的培养条件是有一些不同的。因此，必须注意混合培养的条件，使银耳菌丝和香灰菌丝都能适应同一培养基，同一培养条件。例如将温度控制在20-28℃范围之内（最好是23-25℃）。原种的含水量控制在65%，种植种的含水量控制在65%-70%之间。因为原种培养基稍干，有利于银耳菌丝的生长，不易产生酵母状分生孢子，有利于扩大为种植种；而种植种稍湿一些，有利于酵母状分生孢子的产生和繁殖，此孢子液渗入木屑培养基深处，和香灰菌丝均匀混合，可以弥补银耳菌丝“吃料”不深只长在表层的缺陷，使出耳率更高，更稳定。

　　还必须根据每一瓶原种耳基生育的状况，来确定该原种是否可以扩大为种植种，以及每瓶应扩大几瓶种植种。凡是混合培养后，能使银耳酵母状分生孢子萌发，银耳菌丝能继续生长，形成耳基，耳基能不断长大的组合，都是有实际应用价值的菌种。原种经严格挑选，凡耳基大，银耳菌丝生长多（吃料深的），香灰菌丝粗壮有力，搅拌后扩接的瓶数就多。反之，就不应扩大为种植种。为了更加保险起见，每瓶以扩大40-60瓶为宜。总之，必须使每一瓶新接种的培养基都有银耳菌丝和香灰菌丝，或酵母状分生孢子和香灰菌丝。或者把原种搅拌之后，塞上棉花塞再培养3-5天，使搅断的银耳菌丝再生新的菌丝，这样才能保证种植种的质量。

　　4.　提纯复壮

　　为防止菌种因长期使用，生活力降低，出现耳片发黄，不易开片，再生力差的毛病。根据生产的方式选用不同菌龄、不同生理成熟度的银耳菌株。如段木种植时，应选菌龄小，成熟度低，银耳气生菌丝一白毛团旺盛，不易胶质化的菌株；瓶栽时，应选菌岭大，成熟度高，白毛团小，容易胶质化并易开片的菌株。香灰菌丝应选爬壁力强，羽毛状分枝长的，分解木材能力强的菌株作为段木种植的菌株，而代料种植时，香灰菌丝要稍“弱化”一些的菌株才好，否则满瓶、满袋都是香灰菌丝，有限的营养都被香灰菌丝消耗掉，银耳反而长不大。

　　原种贮藏的时间太长，耳基很大，培养基的养料消耗过甚，菌种的生活力已衰退，应弃之不用。否则使用效果还不如适龄的种植种再扩大培养的菌种。

　　5.　母种保存

　　母种应贮藏在4-15℃的冰箱中。每1-3个月移植一次。原种若不马上使用，也应保存在低温、干燥的场所。种植种满瓶后至45天之内就应尽早地种下去。

　　银耳纯菌种长期单独保藏，所长的子实体有变黄的趋势；而和“香灰”菌丝混合培养，并经过长期保藏，子实体较不易变黄。为了得到雪白的银耳，菌种应从色泽洁白的银耳（野生的或家生的）中进行采种。保种3年以上就应注意色泽的问题。