木耳孢子单核菌株培养性状多态性研究

我国是世界上木耳(Auricularia auricula)的主要生产国，年产量占世界总产量的90%以上[1]。由于真菌菌丝生长缓慢，抗杂质能力弱，严重影响了真菌的产量和品质，制约了真菌生产的持续稳定发展。为提高菌类产量和品质，除改进生产工艺、优化栽培条件、提高生产机械化程度外，还可从育种入手，选择抗逆性强的优良栽培菌种通过杂交育种去除杂质和良好的生产性状。为此，混血父母的选择非常重要。一般来说，如果亲本的性状差异显着，杂交后代的杂种优势就会更加明显，获得优良杂交品系的可能性就越大。杂交育种一般选择优势互补、劣势互补的亲本孢子单核菌株进行杂交。由于孢子单核菌株是减数分裂的产物，通过亲本DNA的交换和重组，菌株之间会存在明显的遗传差异，杂交后代可能会产生一些亲本菌株所没有的新的遗传性状和许多生产性状优于母本。因此，研究黑木耳孢子单核菌株间遗传性状的多态性，探索这些遗传性状在杂交育种理想亲本选择中的应用具有重要的理论和实践意义。一、材料与方法。

1.1 材料

1.1.1 测试菌株

真菌Au-8菌株，保存于河南职业技术师范学院应用微生物实验室。

1.1.2 试验介质

培养基：45%杂木屑、45%棉籽壳、8%麸皮、1%蔗糖、1%石膏，料水比1:1，用于Au-8菌株的小规模培养。

完全培养基（CYM）：蛋白胨2g，酵母膏2g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.46g，磷酸氢二钾1.0g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，琼脂20g，用于Au-8菌株和孢子菌丝培养单核菌株。

1.2 方法

1.2.1 获得Au-8孢子单核菌株

Au-8菌株通过代料培养获得子实体，排出担子孢子，将担子孢子稀释分离得到160株孢子萌发菌株。将萌发的菌株进行插板培养，在显微镜下观察，筛选出无锁状结合的菌株，然后对细胞核进行荧光染色[2]，确定每个细胞只有一个细胞核的菌株为孢子单核菌株.鉴定了58 个形成孢子的单核菌株，并随机选择了38 个用于本研究。

1.2.2 菌丝生长势和菌丝生长速度的测定

激活待测孢子的单核菌株，取单核菌丝体（毛巾=0.6crn，加少量培养基）接种CYM板，每个菌株重复3次，28恒温培养，观察并每天记录菌丝生长情况，测量菌落直径，根据下式计算菌丝体生长速率。

菌丝生长率=（菌落直径-O.6）/（2菌丝生长天数）

1.2.3 对接类型的确定

交配类型采用孢子单核菌株配对培养法确定[3]。

2. 结果与分析

2.1 孢子单核菌株的菌丝生长潜力

根据菌丝生长情况，菌丝生长潜力可分为5种类型。 1型（9株）：菌丝蓬松，气生菌丝旺盛、粗大、致密、色泽自然； II型（11株）：菌丝蓬松，气生菌丝较旺盛，较粗密，颜色为白色； 型（13株）：菌丝细密蓬松，气生菌丝旺盛、粗大、致密、白色； 型（3株）：菌丝弱，气生菌丝不茂盛，色白。淡白色或淡黄色； V型（2株）：菌落呈粉状，气生菌丝细弱，颜色淡黄色。母本菌株Au-8的菌丝生长势属于型。结果表明，供试孢子单核菌株在菌丝生长势方面表现出多态性。

2.2 孢子单核菌株菌丝体生长速率

测定结果表明，供试真菌孢子单核菌株的菌丝生长速率存在一定程度的差异，平均菌丝生长速率为0.164 cm/d。 37号菌株菌丝生长速率最小（0.116crn）d），91号菌株最大（0.213cm）d），两者差异极显着（F：0.05） .与亲本菌株Au-8相比，木耳孢子单核菌株的平均菌丝生长速率低于Au-8（0.184cm/d）。 38株孢子单核菌株中，11株菌丝生长速度快于Au-8，2株菌丝生长速度与Au-8相当，25株菌丝生长速度低于Au-8。孢子单核菌株菌丝体生长速率与理想杂交亲本的关系有待进一步研究。

2.3 孢子单核菌株交配型的确定

木耳是典型的双极异菌食用菌。本研究的交配型测定结果表明，在供试的38株孢子单核菌株中，A型交配型有21株，A型交配型有17株。答：a=21:17。 X2检验表明，两种交配类型之间没有严重的1:1偏差。 2.4 孢子单核菌株菌丝生长势与交配型的关系

单核菌株5种菌丝生长势的交配型分析结果见表1。

表1结果表明，同一类型的菌丝生长势，出现了两种交配类型的孢子单核菌株。根据X2检验，除型外，其他类型单核菌株的两种交配型之间没有出现1:1的严重偏差。由于实验样本较少，本表数据不足以得出两种交配型孢子单核菌株的菌丝生长潜能在各类型间随机分配或均匀分布的结论。但可以说单核菌株的菌丝生长潜能与菌株的交配型之间没有明显的相关性。不同菌丝活力类型亲本在杂交育种中的应用价值有待进一步研究。

2.5 孢子单核菌株菌丝生长速度与交配型的关系

单孢子-单核菌株的菌丝生长速率被人为分为两组：大于平均数（22 株，第1 组）和小于平均数（16 株，第2 组）。对两组单核菌株的交配类型进行分析，结果见表2。

表2结果表明，菌丝生长速率属于同一组具有两种交配型的单核菌株。 X2检验表明，两种交配类型之间没有出现1:1的严重偏差。表明菌丝体生长速度与单核菌株交配类型之间的关系似乎并不明显。不同菌丝生长速度亲本在杂交育种中的应用价值

  3讨论 

  3．1研究结果表明，木耳孢子单核菌株之间在菌丝生长速度和菌丝生长势等培养性状方面出现了一定程度的多态性，变异幅度较大，利用杂交育种选育优良栽培菌株的潜力很大。说明杂交育种仍然是木耳菌种选育实用而有效的方法。在食用菌杂交育种时，一般选择菌丝生长速度较快、菌丝生长势较强的可亲和单核菌株作为杂交亲本，杂交后获得的双核菌株抗杂能力较强。然而，有些菌丝生长速度较慢或生长势稍弱的单核菌株也可能具备其他优良生产性状。因此，科学地选择杂交亲本仍需要进行更加细致人微的系统研究。

  3．2木耳孢子单核菌株菌丝生长势和菌丝生长速度的多态性与其交配型无明显相关性。这一点非常有利于杂交育种过程中具有互补优良性状的可亲和杂交亲本的广泛选择。培养性状多态性在杂交育种中的具体应用有待于进一步研究。

  3．3笔者选用一个木耳生产菌株，研究了38个孢子单核菌株的两个基本培养性状的多态性，得出了“单核菌株菌丝生长势和菌丝生长速度与交配型无明显相关性”的初步结论。本结论仍需要更多木耳生产菌株、更多孢子单核菌株进一步研究验证。此外，木耳孢子单核菌株同工酶、RAPD、RFLPs等的研究将会在更深层次揭示单核菌株之间的遗传差异和多态性，从而更科学地指导杂交育种亲本的选择。此外，如果能筛选一个或几个可综合反映单核菌株农艺性状的遗传标记，将会非常有利于杂交育种实践。

  参考文献 ：[1]杨新美．中国食用菌栽培学[M]．北京：农业出版社，1988．150～151．[2]罗信昌．木耳和毛木耳的极性研究[J]．真菌学报，1988，7(1)：56-61．[3]罗信昌，陈大年．食用真菌核荧光染色技术的研究[J]．真菌学报，1990，9(1)：64～68．