黑木耳液体菌种制作规程

工艺流程：斜面菌初级摇瓶菌二级摇瓶菌发酵罐深度发酵种子接种一、摇瓶菌的制作1斜面菌制备：马铃薯200克（去皮切块，煮熟过滤取滤液）、蔗糖20克、麸皮30克（煮汁过滤滤液）、二氢钾2克、硫酸镁1克、琼脂20克、VB1 10毫克、1000毫升水。 25度培养7天备用。 2.初级摇瓶制作配方土豆200克，葡萄糖20克，酵母膏2克，蛋白胨3克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁1克，VB 110毫克，VB 1000毫升水。 （配方二：4%玉米粉、3%蔗糖、2%麸皮、0.5%酵母膏、0.25%二氢钾、0.1%硫酸镁、0.01%VB1、0.05%大豆油）。 制作：土豆去皮切成薄片，煮20分钟，用四层纱布过滤，取滤液，加水1000毫升，称取其他配料，与土豆液拌匀后放入它们放入一个三角烧瓶中。初级摇瓶用500ml三角瓶，装满200ml，放入5个玻璃球（直径0.5cm），用两层纱布包好制成卫生棉条。拧紧柄以防止摇动时卫生棉条移动。 杀菌：将三角瓶放入立式高压锅内，加足量水拧紧锅盖，打开放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，压力达到0.05时切断电源MPa ，打开放气阀，放冷气至压力表回0，然后关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11MPa，温度达到121时，启动计时器并保持45 分钟。关掉电源让它自然降到0.02MPa，然后放气归0，趁热稍微打开盖子，让剩余的蒸汽把棉塞吹干，然后从锅里拿出来冷却至25C 进行接种。 接种：先关闭接种室，开启紫外线灯照射30分钟，然后用臭氧消毒器消毒60分钟或气雾剂5克/立方米熏蒸30分钟，对接种环境进行消毒。将灭菌后的三角瓶放入超净工作台（或接种箱）中，同时放入倾斜的母种、工具、酒精灯、75%酒精棉球瓶，用灭菌报纸盖住母种，打开它。打开紫外线灯和无菌空气，保持15分钟，然后关闭紫外线灯进行接种。操作人员穿干净隔离衣，戴卫生帽和口罩，用75%酒精洗手、擦手、母种试管和工具，点酒精灯，烧工具和试管口20秒，严格无菌操作程序下，将斜面菌切成0.5cm的小块（不用培养基），移入三角瓶中，使其浮于液面，一般插入5-6块，用棉塞塞住，密封连接好后再次盖好卫生棉条盖，置于25恒温环境中培养72小时。 初级摇瓶培养。静置培养72小时后，液面细菌已长至1厘米无污染，可将三角瓶置于小摇床上。一般可放6瓶（也可用电磁摇床），三角瓶固定。保持培养温度25，打开开关，调速至140r/min，培养96小时。当菌液颜色清澈，菌球密集，占整个培养液的80%以上时，瓶口有浓郁的菌香。可作为种子在二级摇瓶中扩大栽培。