制作黑木耳菌种的方法

(1)母种的制备

用试管做成斜面培养基，接种原试管种（保留种，用于生产的母种为生产母种，可用于扩大原种。

1. 中等配方

配方1 马铃薯综合培养基

土豆200克、葡萄糖20克、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.5克

维生素B110mg 20g 琼脂1000ml 水PH 值自然

Formula 2 合成培养基

土豆20克、葡萄糖20克、磷酸二氢钾2克、蛋白胨10克、牛肉膏5克

酵母膏5g 硫酸镁0.8g 水1000ml PH值自然

2.培养基制作方法

先将土豆洗净去皮切成薄片，称200g，加水1000ml，煮沸15-20分钟，用4层纱布过滤，取滤液加水至1000ml，加琼脂20g ，再将琼脂加热溶化后，加入方剂中的其他药物。

培养基分装应在培养物凝固前进行（琼脂培养基在40凝固）。通常，使用漏斗或分装瓶。顶部安装止水弹簧夹，点胶时将玻璃管的细口插入试管，但不要碰到管壁，每支试管的量为管长的1/4管子。安装好后，套上棉塞，每10支试管扎成一捆，用塑料纸封住棉塞，并用绳子扎紧。

3.杀菌

将分装试管捆扎好，放入高压蒸汽灭菌器中，在1kg/cm2压力下（锅内温度达到121）灭菌20分钟，杀灭包括芽色在内的所有微生物。当压力降到0度时，慢慢放掉锅内的气体，待培养基未凝固时，将试管放在斜面上。

4.接种、培养

用无菌操作方法将菌株插入试管斜面，28放置3天，然后降温至24继续培养。约12-15天后，菌丝将覆盖整个试管斜面，（生产）母种形成。

(2)原种、制备

将母种接种在原种培养基上，然后对原种进行扩繁。原始种子通常装在罐子或袋子里。

1. 中等配方

配方1 木屑麸皮培养基

Broadwood 78% 麸皮20% 糖1% 石膏1% 水65% PH 天然

配方2 棉籽壳木屑混合培养基

棉籽壳90% 糖1% 麸皮5% 过磷酸钙3% 石膏粉1% PH Natural

2.混合装袋

选用新鲜无霉变的原料，按生产需要量计算配料总量，将麸皮和石膏粉在培养料中混合均匀，水解溶解糖和过磷酸钙，按上述干料量加水，比例为1：1、3拌匀，堆肥的含水量以60%为宜，以双手紧握堆肥指间有水滴为宜。堆放30分钟后，装瓶（袋）。通过机械或人工装袋略微压实。 （塑料袋规格一般为9*21*0、04，单层袋宽9厘米，长21厘米，厚4厘米）其实就是在袋口外面套上一个塑料圈，形成一个瓶子，然后放入袋口，塞的松紧度以卫生棉条为宜，或者用牛皮纸包好。

3.杀菌

原种杀菌有两种方法，高压杀菌和常压杀菌。高压灭菌也称为加压蒸汽灭菌。灭菌原理：高温（120）高压（1kg/cm2）灭菌2-3小时，杀灭包括孢子在内的所有微生物。常压灭菌称为循环蒸汽灭菌。由于灭菌设备、条件和基本因素的不同，温度在90~103之间变化。菌种，一般在100下保持810小时。

4. 接种与培养

不论接种箱或接种室，接种前应先用0.2%的来苏尔或漂白水对接种箱或接种室进行消毒，然后将灭菌后的料瓶（袋）放入接种箱内或接种室内、用紫外线照射30分钟后，在无菌条件下接种，或在接种前用气雾剂密闭熏蒸灭菌。即点燃气雾剂消毒时应关闭门窗。接种室消毒，每间点燃3盒50克气雾剂；接种盒每次重量仅为40克，但分为2包，其中2包可点燃（每包2克）。一般为18180cm，每管母种可接4-6瓶（袋）原种。将接种好的菌种瓶（袋）放入菌室内进行培养。培养室温度22-26，相对湿度80%以下，光线为弱散射光。发芽期要保持良好的通风条件。原种从接种到菌丝长满瓶（袋）需要30-40天。

(3) 品种准备

原始物种进一步繁衍，即栽培物种。栽培品种一般装在15330.05的塑料袋中，用无棉盖密封。一瓶原种可收栽培种50瓶（袋）。培养基配方和配料、装袋、灭菌、接种、菌种管理同原种塑料袋制。

(4)、菌种品质鉴定

菌种的好坏不仅关系到菌种能否成功培育，还关系到产量和效益。菌类栽培必须严格控制质量。菌种的质量鉴定有两方面的意义：一是分离培养的菌种是否为栽培所需的菌种。二是菌株是否为优良菌株。黑木耳菌株的正常菌丝应该是白色的，有活力的。真菌培养45天后，瓶（袋）间自上而下出现菊花状或梅花状胶质原基，颜色为亮褐色至深褐色。若瓶（袋）底有淡黄色液体，或上部出现黄色粘液，则培养基收缩，为过期菌，应淘汰。

如果该菌种的菌丝只发到瓶（袋）的1/3~1/2处，且有淡黑色胶状耳基，说明该菌种过早，或膨大次数过多，或者修炼室内光线太强。如果菌丝只长在一个角落，不蔓延，可能是培养基太干、太湿或干湿不均造成的。如果菌丝蔓延不停，且有明显的抑制线，多为杂菌所致。在发芽过程中，如发现杂菌，应及时检测，不得使用。