(1)孢子的采集和培养：最好用孢子采集孢子，分离对象应选择适合本地区生长的优良菌株。在一、二期湿菇中，选择生长正常、出菇整齐、无病虫害、菇形圆润、洁白、盖厚、柄粗的单生菇作为种菇。将无菌盒放入0.1%汞酸溶液中浸泡1分钟消毒，用无菌水冲洗干净，然后用无菌纱布擦干表面，然后插入孢子采集器的三脚架内，盖上带孔的钟罩， 22~24培养。培养皿变成褐色时，用无菌水稀释，用无菌注射针吸取孢子液，每支PDA培养基试管滴1-2滴，24培养9-12天。长出星形菌落，就是蘑菇菌丝。
(2)单菌落的选择：孢子萌发的菌落需在肉眼可见时挑出，移至斜面培养基中，待菌落长至蚕豆大小时进行选择。蘑菇菌丝有两种类型：气生菌丝和匍匐菌丝。气生菌落选择菌丝尖直、生长势强、分枝清晰、基部菌丝旺盛、生长较深的菌落。将选好的菌株在20-22摄氏度继续培养，然后分管。当菌丝长到坡度的1/2时，取其中两株进行高温试验，置于35摄氏度24小时，再放回常温下培养，观察菌丝生长恢复情况，以生长快、倒伏黄化少为宜。待菌丝充满试管斜面后即可使用。高温试验的同时，取部分菌种接种到原种瓶中，用堆肥变成红褐色，菌丝尖长得直而粗，排列稀疏清晰， 呈扇形生长。生长旺盛，堆肥是蘑菇特有的。有好香者更佳。匍匐的菌落，最好是白色蓬松的。对于规模化生产的菌种，除进行母种和原种的观察和选择外，还必须进行菌种鉴定。应选择食用变色快、土壤渗透力强、出菇快、产量高的菌种。优质菌种。
(3)原种和栽培种的制作：粪草培养基——小麦草株：取干麦秸25公斤，干粪25公斤，石膏粉0.5公斤，加水适量，堆肥发酵。并在阳光下晒干以备后用。制种时，将发酵后的小麦秸秆剪成3厘米左右的长度，取草50公斤，加石膏0.5公斤，水80-90升（含水量65%-68%），拌匀，堆放它在现场1-2小时。让水渗透到材料中后，就可以装瓶了。装瓶时，用锥形木棒在材料中心打孔，直至紧贴瓶底。材料装好后，塞上卫生棉条，消毒。接种原种是摘取一小块母种菌丝体，与培养基一起放入粪草堆肥瓶中。一般一个母种可接4~5瓶原种；放入粪草或其他培养基中，一般1瓶原种可接50~60瓶栽培种。菌种连接后，在温度22-25、湿度65%左右的培养基中培养。 粮食培养基1——粮食株：取饱满的小麦10公斤，洗净，加水15升，煮沸15分钟。冷静。制种时，取熟麦粒10公斤，加石膏135克，碳酸钙35克，拌匀，装瓶，灭菌，冷却接种，在25左右培养。栽培过程中要经常摇动种子瓶。 河泥牛粪培养基——河泥菌种：将湿河泥和碾碎的干牛粪按1:1（体积比）混合，堆成馒头自然发酵1周，摊开并在阳光下晒干。制种时，用2%的石灰水拌料。水份是用手揉捏的。建议在摇晃时分散。将pH调至pH9，然后装瓶并灭菌。粪便培养基-米糠一株：河泥与猪牛粪按1：（体积比）混合堆放，同时麸皮与猪牛粪也混合堆放1:1 的比例。然后将两种发酵好的料按1:1的比例混合。调节湿度和pH值至9，灭菌，冷却后接种。 （来源：山东人民广播电台信息）
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