蜜环菌母种生产与转扩的改革方法

1、将试管斜面改成试管柱。因为蜜环菌的母种蜜环菌可以以菌索的形式存在，菌索具有输送氧气的能力。因此，蜜环菌亲本的培养可以采用试管柱的形式进行。试管菌柱的制作减少了摆锤的操作环节。菌柱的高度和试管斜度也只占试管的1/2到3/5之间。 18mm180mm试管的液体体积为18mL20mL，20mm200mm试管的液体体积为23mL-25mL，液体体积为试管斜面的2.5倍。试管菌柱培养的母种见图1，增加了同一容器中母种的生产数量，节约了成本，提高了效益。 2. 将实体模式改为半实体模式。用玉米粉100g、黄豆粉10g、麦麸80g、蔗糖（白糖）20g、水1000mL作为蜜环菌亲本培育配方。培养基状态为半固体，具有流动性。先将称好的玉米粉、黄豆粉、麸皮和适量的水混合均匀。加入足量的水煮，水开后开始计时，保持35分钟，加热过程中注意不时搅拌，以免糊锅。注意适量加水，补充加热过程中流失的水分。煮熟后加入所需的蔗糖，趁热用注射器或其他器具装入。分装后，塞入卫生棉条，将试管竖直放置。因为培养基比较有营养，玉米粉要完全杀菌比较困难。因此灭菌时间应比常规培养基稍长，一般控制在0.15MPa高压条件下35min40min。灭菌完成后，待试管冷却至不烫手时取出试管，垂直放置，待完全冷却后即可开始接种操作。以玉米粉等为原料半固态栽培的蜜环菌母种见图2。 3.将PDA介质改为综合介质。采用传统PDA、PDA富集、PDA+大豆粉等培养基培育蜜环菌母种。形成褐变和角质化。并采用马铃薯100g、木屑50g、麦麸50g、玉米粉50g、琼脂10g、KH2PO42g、MgSO41g、VB110mg、水1000mL的综合配方培育蜜环菌母种。密集，生长势强，日平均生长速度5.18mmd-1。且经过一年的保存，脱水不严重，经久耐用。用PDA培养基的亲本质量有显着差异，在推广中增产明显。 4、将试管表面的膨胀改为试管底部的破胀。鉴于蜜环菌母种从试管表面接种容易被污染，笔者进行了多次从试管底部破扩实验，成功率如下：高达98%。具体操作步骤如下： 第一步，选择强母种试管；第二步，用宽透明胶带将试管下半部分的菌柱包裹起来，用75%的酒精消毒；第三步，清洁台面或接种箱内打破管底，无菌操作时用一只手握住试管口处的棉塞，另一只手用镊子挑母菌从试管底部的破损部分进行转移膨胀接种。