新疆野樱桃李（Prunuscerasifera）的茎叶培养及植株再生

摘要： 以新疆野樱桃李为材料，研究基础培养基、植物生长调节剂种类、浓度及配比、蔗糖浓度等因素对茎腋芽萌发、生长、增殖及叶片不定芽萌发的影响。研究过。建立了叶片再生系统。结果表明：1）植物生长调节剂组合IAA0.4rag/L+6-BA 0.8 mg/L更适合酿酒李茎段腋芽的萌发和生长；培养基为3/4MS+LAA、5malL+6-BAl.0mg/L+蔗糖30g/L； 3）ZT诱导不定芽再生效果优于6-BA，zTl.5mg/L+IBA0.05mg/L是最适宜诱导不定芽再生的植物生长调节剂组合； 4）暗培养是叶片不定芽再生的必要条件，在最适合不定芽再生的培养基上，暗培养14天的不定芽再生效果最好； 5)樱桃李不定芽的最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.4mg/L。关键词：野樱桃李；茎段腋芽：叶：植物再生我国是各种果树的起源和进化中心，野生果树资源极其丰富[1]。现有野生果树资源。它是长期自然选择的产物。它不仅具有丰富的遗传多样性，还含有大量抗逆等优良基因。其中，新疆野苹果（Malus sieversii (Ldb.) Roerm.）、野樱桃李（Prunus cerasifera Ehrh.）、野杏（Arrneniaca vulgaris Lam.）、野核桃（Juglans re-gia）组成的伊犁野果林L.）是中亚沙漠山区罕见的“海洋”阔叶林。叶林孑遗群落是北方落叶果树遗传育种的基因库，十分珍贵[2]。但由于掠夺性资源开发、农田开垦等因素，野果树资源遭到严重破坏，野果林面积急剧减少，濒临灭绝。因此，研究建立多层次的保护保鲜技术体系，有效保护包括新疆野樱桃、李子在内的新疆野生果树资源迫在眉睫[3]。国内外关于核果果树组织培养的研究报道较多，但针对李子的研究相对较少[4]。研究了因素并成功获得了原生质体来再生植物。赛斯等人。 [6]采用适当比例的TDZ和IBA组合，成功诱导欧洲李（仅限家梅）叶片再生植株；芭芭拉等人。 [7]研究了蔗糖、葡萄糖等碳源在叶片再生过程中的作用，也成功获得了叶片再生植株；樱桃李（P.cerasifera Ehrh.）是欧洲李的亲本之一，其组织培养研究尚未见报道。为此，课题组在近年来对伊犁地区野生果林的调查研究基础上[8-9]。对野生酿酒李的茎段、叶培养及植株再生进行了研究，旨在为进一步野生酿酒李种质资源的超低温保存和转基因研究奠定基础。 1 材料与方法1.1 材料实验2005-2007年在山东农业大学作物生物学国家重点实验室和山东农业大学泰安横岭果树繁育基地进行，试验材料为3年生樱桃山东农业大学泰安横岭果树繁育基地从新疆伊犁引种李子。 4月至6月，选取当年发芽的枝条，除去基部叶，保留顶部1-2片叶。首先将材料放入水与清洗比例为1:500的溶液中，然后用试管刷除去其上的灰尘。用自来水冲洗，切成2-3厘米长的茎，在氯化汞（0.1%）中浸泡4-5分钟以消毒表面，然后用无菌水冲洗6-7次。 1.2 方法1.2.1 茎腋芽培养及多丛芽再生体系构建在浓度0.6-1.0 mg/L的培养基上生长较好。因此，选取生长素质量浓度0.4 mg/L、细胞分裂素质量浓度0.8 mg/L作为不同植物生长调节剂组合的浓度。选择IAA、NAA和2.4-D作为生长素物质，选择6-BA和KT作为细胞分裂素物质。共设A1、A2、A3、A4、A5、A6 6个处理（表1）。接种40个外植体。分别测量幼苗数、真叶数和幼苗高度。

各处理的基本培养基为MS。向每种培养基中添加30 g/L蔗糖和7 g/L琼脂，调节pH值至5.8。培养条件：光照强度2000lx，光照时间12小时/天，温度25。增殖培养采用k(34)正交试验设计优化增殖培养基，4个因素3个水平分别为：基础培养基（MS、3/4MS和1/2MS）、IAA（0.7、0.5和0.3mg/L）、6 -BA（1.0、0.8 和0.6 毫克/升）、蔗糖（40、30 和20 克/升）。向每种培养基中添加琼脂7 dE，将pH值调节至5.8。培养条件同1.2.1。每组接种40个外植体，测定增殖系数，然后采用SAS 9.0统计软件进行分析，对数据进行极差分析。 1.2.2 叶片再生培养基于前期实验和前期研究[10]。取叶龄25-30天的组培苗，选取植株的中上部叶。弃去叶缘、叶尖，沿主脉两侧剪3-4个切口，接种于培养基（图4）上，基本培养基及培养条件同1.2.1。根据叶片通过器官发生再生不定芽的主要途径，研究了植物生长调节剂6-BA与2,4-D、ZT与2.4-D组合对愈伤组织诱导的影响，并研究了植物生长调节剂6-BA与2,4-D的组合对愈伤组织诱导的影响。 BA和IBA以及ZT和IBA对叶片不定芽再生的影响，6-BA和ZT的质量浓度分别为：0.5、1.0、1.5、2.0mg/L，2.4-D和2.4-D的质量浓度为：0.5、1.0、1.5、2.0mg/L。 IBA 为0.01、0.05、0.10、0.15 mg/L。每组接种40个外植体，测定愈伤组织诱导率、不定芽再生率和每个外植体再生芽数。以不暗培养叶片作为对照，暗培养时间设置为7、14、21、28天，探讨暗培养时间对叶片不定芽再生的影响。 1.2.3 生根培养在本实验室研究工作的基础上[11-12]，2种基础培养基（MS和1/2MS）和3种IBA质量浓度（0.6、0.4、0.2 ms/L）共选取6个处理进行生根培养试验，分别测定各处理的生根条数、植株数和平均根长。 2 结果与分析2.1 野樱桃李茎段腋芽培育及多丛芽再生体系构建2.1.1 植物生长调节剂组合对茎段腋芽萌发和生长的影响樱桃李的调查结果如表1所示。所选的3种生长素和2种细胞分裂素各处理的出苗率、真叶数和苗高存在一定差异。 IAA的效果明显优于2.4-D和NAA，6-BA的效果优于KT。总体而言，治疗A1（IAA 0.4 mg/L+6-BA 0.8 mrCL）效果最好（图2）。因此选择IAA和6-BA作为茎段腋芽萌发生长

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