不同类型蕨类植物外植体的去分化和分化能力

皮革蕨（R um ohra adiantiform is）是穗科蕨属的多年生植物，叶深绿色，羽状半裂，叶革质。近年来已成为世界上新的切叶植物，具有巨大的开发价值和潜力。传统栽培中，蕨类植物主要通过分株或孢子繁殖进行繁殖。分株繁殖效率低、速度慢、繁殖系数小，长期采用这种无性繁殖方法会引起严重的生理性叶枯病，导致种系退化，产量下降和质量；孢子繁殖对环境条件和技术条件要求高，周期长，变异大，难以保持原有的良好性状，因此苗木繁育缓慢。利用组培方法获得再生植物，并在短时间内快速繁殖，获得大量组培苗是解决这一问题的公认有效途径。然而，要使用的具体组织或器官取决于培养系统的目的和所涉及的植物物种。同一植物的不同组织和器官的再生能力存在很大差异[1]。研究表明，以波士顿蕨新叶尖为外植体[2]，可获得愈伤组织，诱导簇芽，培育完整植株；蕨类植物[Pteridium aquilium (L.)K uhn] 获得有或没有顶芽的幼根茎[3]，用于G G B 分化和出苗；王鹏伟等将肾蕨茎的不同部位接种于M S+IA A 0.5m g/L+NA A A 0.1m g/L培养基G G B（绿色球体）中并进行器官诱导[4]。本实验通过比较外植体MS+IA A 0.5m g/L+NA A 0.1m g/L培养基上不同部位的去分化程度，研究了P的分化能力最强的外植体类型。 1 材料1.1 试验材料试验材料为栽培过程中已转绿、生长一致的蕨类植物无菌茎尖、茎段和幼叶。 1.2 试验方法1.2.1 不同类型外植体去分化能力的比较。将蕨类植物无菌茎尖、茎段和叶片接种于MS+IAA 0.5m g/L+NA A 0.1m g/L[5]培养基上，每个处理接种20瓶，1个外植体/瓶，60天后，计算诱导愈伤组织的数量。愈伤组织诱导率(%)=(诱导愈伤组织的外植体数量/插入的外植体数量)100%。 1.2.2 不同来源愈伤组织分化能力比较。愈伤组织形成后，将茎尖、茎段、叶不同来源的愈伤组织转移至MS+IAA 0.5m g/L+NA A 0.1m g/L培养基中，每个处理接种20瓶，1个外植体/瓶，观察分别统计第45天和第60天的芽分化数和成芽率。发芽率（%）=（已分化不定芽的外植体数/接种的外植体数）100% 2 结果与分析2.1 不同类型外植体去分化能力比较由表2-1可以看出，愈伤组织诱导和分化能力茎尖和茎段去分化能力较强，其中茎尖和茎段愈伤组织诱导率达100%，而叶片诱导率较低。然而，叶子和茎尖的平均愈伤组织数量较多。接种后约20天，茎尖顶部膨大，逐渐产生一群GGB（绿球），其上有针状小突起，此后逐渐形成愈伤组织。茎段和叶愈伤组织缓慢出现，培养30天后切口处形成少量肿瘤样结构，40天后切口处形成愈伤组织。接种后大部分上部或边缘小叶呈褐色，诱导愈伤组织能力较弱。因此，除了茎尖和茎段外，利用合适位置的叶片也是诱导愈伤组织的选择。 2.2 不同来源愈伤组织分化能力比较。三种外植体可以不同程度地分化和发芽。愈伤组织形成45天后，即可分化出羽状叶，并可产生丛生苗。由表2-2可以看出，茎尖愈伤组织分化能力最强，愈伤组织的平均芽数和成芽率最高。一般来说，该条件下分离组织的器官分化能力顺序为：茎尖叶茎段。 3 讨论利用组织培养技术进行植物快速繁殖，大多采用Murashige[6]提出的工业化生产方法，即增加不定芽的数量，增加腋芽的发生。在组织培养过程中，其增殖途径在于诱导GGB并随后增殖。 GGB的结构与愈伤组织不同，但与兰花原球茎相似[7]。

与诱导不定芽增殖的方法相比，诱导GGB形成的方法大大提高了繁殖增殖效率。实验中，以蕨类植物茎段为外植体进行体外培养，可诱导GGB产生GGB，且后期GGB可再分化，但与茎尖组织培养相比，茎段上产生的GGB量较少很小，速度也慢很多。 （收稿日期：2006-05-15）参考文献： [1]郑家燮，李华东，甘永辉。蜜宝菠萝组织培养及低成本快繁研究[J].果树学报，2005，[2]曾松军.华南植物园蕨类植物园。植物学报，2000，25-26。 [3]苏建宇，王军，李吉宁，梁文宇，华振吉。蕨类植物的组织培养[J]植物生理学通讯，1996，(05):361.[4]王鹏伟.罗氏菌组织培养快速繁殖研究[J].北京林业大学学报，1998，20(2):108.[5]马可科尔多瓦(Marco A. Cordoba) Rumohraadianantiformis 的微繁殖[J].林业研究， 2002, 13(1) : 41- 54. 刘瑞林， 王凤斌， 任如意.蕨类植物组织培养的研究现状。中国林业副产品，2003，(02):16-17。 [6] Murashige T，等。一种改进的烟草组织培养快速生长生物测定培养基[J].生理学植物，1962，15: 473-479。 [7]谭文成，戴策刚。观赏植物组织培养技术[M]北京：中国林业出版社，1991.127。