灵芝菌种分离：分离物的提纯法介绍

为了获得单一且高纯度的灵芝菌株，需要通过生物手段从混合微生物群落中分离出灵芝。

灵芝菌种分离物的提纯方法

在分离培养过程中，不可避免地会带入杂菌，因此必须对分离物进行纯化。通常使用药物或生物技术来去除污染物。

灵芝菌种菌丝的提纯方法

分离得到菌丝转移到斜面或平板后，有时菌落边缘不规则，颜色不一致或底物分泌的色素不均匀，这是不纯菌株的表现，必须提纯。该方法是用锋利的接种刀将斜面或平板上具有灵芝特征且生长速度一致的菌落移植到新的斜面或平板上，如此反复多次，获得纯菌丝体。

灵芝菌种细菌污染的排除

PDA培养基配制于锥形瓶中，带棉塞，0.103 MPa灭菌30分钟，无菌条件下冷却至近50，每升培养基中加入40 mg链霉素或金霉素，迅速分装于无菌试管或培养皿中，制成斜面或平板备用。

1.覆盖灭菌法：从受污染的灵芝菌株中挑取少量菌丝体，移植到加有抑菌剂的PDA斜面或平煤培养基上，于23~25避光培养。在这个温度下，灵芝菌丝体可以正常生长，但细菌生长非常缓慢。待看到菌丝生长扩散后，取另一个装有抑菌剂的斜面，加热融化，冷却至50左右，倒入长有灵芝菌丝的斜面或平板中，凝固后在上述温度下培养。这样灵芝菌丝体可以通过覆盖的培养基生长，而细菌被阻挡在新加入的培养基下，然后通过旋转管培养可以纯化顶部菌丝体。

2.木屑过滤法：切掉试管底部，在两端有棉塞的试管中放入少量木屑培养基。灭菌，冷却，从一端接种一小块被污染的细菌，在23-25下避光培养。灵芝菌丝体可以深入到木屑中，直到另一端。然而，细菌生长非常缓慢，同时，它们可以& amp#039;不能分解锯屑而被堵塞。灵芝菌丝体可从另一端采摘，用于试管旋转。

灵芝菌种霉菌污染的排除方法

这里主要指操作不当带入的霉菌和造成的污染的排除方法。

1.覆盖抑菌法：在斜面或平板上发现霉菌菌落时，用比菌落略大的滤纸蘸0.5%多菌灵溶液覆盖霉菌菌落，抑制霉菌生长，而灵芝菌丝体继续生长。然后，挑取顶端菌丝，用旋转管纯化。

2.药物过滤法：与上述细菌木屑过滤法相似，在木屑麸皮培养基中加入0.5%多菌灵，置于无底试管中，两端有棉塞，灭菌，一端接种带菌分离物，28避光培养。因为多菌灵对霉菌有很强的抑制作用，所以对灵芝菌丝体的生长影响不大。当灵芝菌丝体长到另一端时，可以用旋转管纯化。