灵芝菌种分离：孢子分离法介绍

为了获得单一且高纯度的灵芝菌株，需要通过生物手段从混合微生物群落中分离出灵芝。

灵芝菌种孢子分离法

一种从灵芝子实体中收集成熟的有性担孢子，培养并萌发成纯菌丝的方法。孢子分离出的菌丝菌龄短，活力强，有性孢子具有亲本的遗传特性，是选育新菌株和杂交育种的材料。

1.孢子采集：以灵芝为例，选取红褐色、有光泽、成熟、无白色生长环的典型个体，见瓶(袋)上有少量散在的孢子粉，切去梗，用棉球蘸0.1%氯化汞溶液，反复擦拭盖的正反面，再用无菌水充分清洁破洞。孢子采集方法如下。

(1)弹射法：在无菌条件下，用烧过的粗注射针在灵芝切断柄的地方钻一个深入菇肉的小孔，插入培养皿的铁丝架中。培养皿置于铺有纱布的搪瓷盆中，盖上钟罩或无底蘑菇瓶，在28-30、相对湿度90%的条件下培养。当大量褐色孢子落入培养皿时，取下钟罩和支架，盖上培养皿，用透明胶带或无菌纸密封备用。所有使用的器械必须事先用纸包好，进行灭菌和无菌操作。

(2)贴壁法：在锥形瓶(即三角瓶)中装入1 cm厚的PDA培养基，用棉塞灭菌，冷却至平板状。无菌条件下，如上所述对无柄子实体表面进行消毒，放在无菌纸上，沿菌管方向切开几个小块，然后拔出锥形瓶塞，将小块子实体的皮壳部分蘸上胶水粘在棉塞底部，放回锥形瓶口上。28~30培养时，棕色孢子落在培养基表面，无菌条件下可去除棉塞上的菌块。

附着方法也可以附着到试管斜面正上方的管壁上。如果菇盖比较厚，可以切掉一部分皮和肉。当孢子散落在斜面上时，取出蘑菇块。

2.菌丝体培养：在无菌条件下，将弹射法收集的少量孢子浸入接种环中，在斜面上摇匀，或将少量孢子放入试管中的无菌水中(最好用20%灵芝子实体煮汁)制成孢子悬液，然后浸入斜面或平板上，在28~30培养。用附着法在平面或斜面上接收的孢子，可直接在适宜的温度下培养一周左右。孢子萌发后，挑取萌发早、生长旺盛的菌落，移植到新的斜面上，培养后得到母种。