食用菌种的分离和培养技术介绍

在自然界中，食用菌并不是单独存在的，而是与许多细菌、放线菌、霉菌等共同生活。所谓菌种分离，就是将这些与食用菌共生的杂菌分离出来，通过培养获得纯正的优良菌种。菌株分母种、原始种、栽培种。有关种子生产程序，请参阅图13。 (1)亲本分离培养食用菌亲本分离可分为孢子分离法、组织分离法和基菌丝分离法。 1、孢子分离法孢子分离法是将食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。该菌株生命力强，但个体孢子存在差异，自然分化现象严重，变异大，需进行出菇试验后方可用于生产。 (l) 单孢子分离法：每次或从每个试管中只取一个担子孢子，使其萌发成菌丝体，得到纯菌种的方法。从蘑菇和草菇中分离出单孢子得到的菌丝具有结果能力，可以用这种方法分离生产纯菌种。单孢子分离在生产中很少采用，工艺复杂，一般采用多孢子分离。 (2)多孢子分离法：是将许多孢子接种在同一培养基上，让其发芽、自由交配，获得纯正食用菌的方法。具体操作方法如下： 蘑菇孢子喷射法：选择8090%成熟的籽菇，健壮、圆形、直立、无病虫害、出菇均匀、产量高、适应性强，切段关闭大的。部分用无菌水清洗菌柄数次，然后用灭菌纱布、脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，用铁丝将种菇菌鳃倒挂在玻璃漏斗下，将漏斗倒扣盖在培养皿上；用棉花塞住上端的小孔。将培养皿放在铺有纱布的搪瓷培养皿上，静置1220小时，菌鳃上的孢子就会散落在培养皿中。形成一层粉状孢子印（平菇极淡紫色，香菇、草菇呈褐色，香菇、金针菇孢子印呈白色）。用接种针蘸取少量孢子，在试管或培养皿上划线划线。当孢子萌发形成菌落时，选择孢子萌发早、生长好的菌落进行试管培养。孢子也可以用孢子收集器收集。方法是将蘑菇选好后，按上述程序，轻轻提起玻璃钟罩，将蘑菇柄朝下插在孢子采集器的网架上，置于培养皿中央。立即盖上玻璃罩，并用纱布塞满铃掌。并在纱布上倒少许水银升或无菌水。转移至20左右的培养箱中培养。 褶皱涂抹法：按无菌操作分离时；选用成熟的种菇，将接种针直接插入菌褶之间，轻轻擦去菌褶表面尚未从子实体中喷出的孢子，然后在培养基上划开。线接种。 挂钩法：取成熟菇盖的菌鳃几片或一小片耳片（黑木耳、木耳、银耳），用消过毒的不锈钢丝（或铁丝、棉花）挂在三角瓶中线和其他悬挂材料）不要让它接触培养基或周围的瓶壁。在合适的温度下培养和转移。 贴附法：按无菌操作取一小块成熟的鳃或耳，用融化的琼脂培养基或阿拉伯树胶、糊状物等贴在试管斜面培养基正上方的试管壁上。培养612小时后，当孢子落在斜坡上时，立即将孢子连同部分琼脂一起培养。孢子分离得到的母种要进一步提纯复壮。当母种栽植一周左右，菌丝布满坡面时，选择菌丝健壮、旺盛、不老化、不感染的菌丝。杂菌母种的试管，再转扩管，一般到栽培种，转数不宜超过5次。孢子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质品系，方可用于生产。一般的真菌，如香菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等，都可以通过多孢子分离得到。吊种穗三角瓶培养12小时后，瓶底培养基表面出现“孢子印”。

取出种穗，置于2025的培养箱中培养23天。培养基表面会有乳白色透明糊状小菌落，是银耳酵母状分生孢子形成的少量银耳菌菌丝体。此时转移到试管的斜面培养基中，待斜面充满后，转移到表面相对干燥的富含营养的培养基中。大约30 天后，菌落长出白色菌丝。银耳的酵母状分生孢子和菌丝只有与羽状菌丝（香灰菌丝体）的子囊菌混合才有利于银耳孢子的萌发，后者有助于分解木材和其他纤维状物质，提供养分。蚕丝定殖和子实体形成。当两种菌丝相遇时，先选择两种纯菌丝。羽状菌丝的提纯繁殖，一般需要选择生长快、爬壁能力强的试管斜坡或种子瓶，取顶端菌丝，移管，置于25- 28培养，重复多次转管可获得优良纯种。银耳菌丝体的特点，菌丝体生长缓慢，担孢子不易发芽。进行两菌混合时，先取培养810天的银耳菌丝斜面，用无菌法在距银耳菌丝约0.5厘米的斜面上插入一小块羽状菌丝。置于25培养1周，得到混合银耳母种。 2、组织分离培养法利用子实体内部组织通过无性繁殖获得母种的一种简单方法，即组织分离法。该方法操作简单，菌丝生长快，品种特性易于保存。特别是杂交育种后，通过组织分离可以稳定优良菌株的遗传特性。常用的分离方法有以下几种。 (l)子实体分离：香菇要选用花大、盖厚、柄短、八九熟的优良品种。将蘑菇的两个基部切掉，在无菌盒中浸入0.1%氯化汞水中几分钟，然后用无菌水冲洗并擦干或用75%酒精棉球擦拭菌盖和菌柄两次进行表面消毒。接种时，只需撕下种菇，在菌盖与菌柄或菌鳃交界处挑一小块组织；将其传输到PDA 介质。 25左右培养3-5天，组织上可见白色绒毛状菌丝，转管扩大即得菌株。如香菇、平菇等都可以用此法。 (2)菌核分离：不易采集茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体。常见的是它的菌核，储存养分。菌种也可以通过菌核分离获得。方法是将菌核表面清洗干净，用酒精或氯化汞消毒，切开菌核，取一小块中间组织，约黄豆大小，接种于PDA培养基的斜坡上，留着温暖的。需要注意的是，菌核是贮藏器官，大部分是多糖，只含有少量菌丝，所以挑取的组织片要大一些，组织片太小，很难分离菌丝。菌株。 (3) 霉菌素的分离：部分子实体

　　3．基内菌丝分离培养法 　　利用食用菌生育的基质作为分离材料，来得到纯菌种的一种方法，叫基内菌丝分离法。 　　此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现，而且是朝生暮死，不易采得的子实体。基内分离法与组织分离法不同之点是，干燥的菇木或耳木中的菌丝常呈休眠状态。接种后有时并不立刻恢复生长。因此，有必要保留较长的时间（约1个月），以断定菌丝是否能成活。基内菌丝分离法又可分为，材中菌丝分离（即菇木或耳木分离法）及土中菌丝分离法等。 　　（1）材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法，为了减少杂菌的感染，菇（耳）木在分离之前，必须进行无菌处理。可以把菇（耳）水表面用酒精灯火焰轻轻烧过，以烧死霉菌的孢子，或再用0.1％的升汞水浸孢几分钟，然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干。接种块切取时应注意。接种块必须在该菌菌丝分布的范围内切取。所以，菌丝生长缓慢的种类应浅取；菌种生长快的种类可以深取。同时。还应根据菇菌的种类、木材质地、菇（耳）木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围。然后用一把利刀进行切取。接种块应尽量小些，以减少杂菌感染机会，提离菌种的纯度。接种块移到培养基上，就应该放到适合菌丝生长的22℃～26℃ 的温室或温箱中培养，使菌丝恢复生长。 　　　（2）土中菌丝分离：食用菌种类很多，许多土生的食用菌；孢子不易萌发。组织分离也不易成功，用土中菌丝分离获得纯种的方法，叫土中菌丝分离。 　　土中菌丝分离时要注意，由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生物，因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰，尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种，反复用无菌水冲洗，在培养基中加入一些抑制细菌 生长的药物，如 40微克／升的链霉素或金霉素。如发现感染细菌，可以把菌落边缘的菌丝挑出来，接种到木屑培养基中。因细菌没有分解木质素的能力，因此在木屑培养基中不易扩展；只局限于接种处。待菌丝长出感染区后，就可以再进行扩大提纯了。 　　（3）子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌丝的方法，叫子实体基部分离，现以袋栽银耳为例说明： 　　从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中；选择生活力最强的幼耳5袋，移到气候温和，有散射光的野外场所进行后期培养，以增强菌丝体的生活力。经培养7～10天后，待子实体直径达4～5厘米时便可取回，作为分离的母体。再从中筛选最理想的一朵，用利刀割掉银耳子实体，放置于 0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜，以便杀死瓶中的害虫。然后用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质，连同接种工具、接种培养基等移进无菌室。经灭菌后，用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除，并进行培养。待袋口露出白色菌丝时，用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体，迅速移入母种试管培养基的中央，轻轻地脱去接种针， 塞上棉塞。 为了能够获得较多的母种，一次接种量要有100—200支试管，以便从中选择。分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养。由于培养基内水分较多，菌丝恢复要比耳木分离得快。经2-3天后，分离物的边缘就可看 到白色菌丝。每天要至少观察两次，以便提纯。观察、提纯方法与耳木分离法担同。经适温培养10-15天后，当接种块扭结团出现红、黄色水珠时，即可扩大原种。

　　（二）原种和栽培种的接种培养 　　母种获得以后，为了满足菌种生产的需要。应选出优良、纯度高的母种进一步扩大为原种。 　　原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基。 　　瓶装或袋装的原种培养基灭菌后，可送入灭过菌的接种箱内，待瓶中的培养基冷至30℃以下，可按照无菌操作程序进行接种。 　　菌种瓶（袋）放入培养室时，要经常进行检查，一经发现杂菌污染，立即取出