食用菌菌种保藏技术

菌种是食用菌生产的主要生物资源和主要生产资料。优良品系选育后，必须尽量保持其优良性状不变或减慢，以免降低生产性能，才能长期用于生产。因此，菌种保鲜在食用菌生产中具有重要意义。一、菌种保藏原理菌种保藏的方法很多，但原理大同小异。首先要选择好的纯种。利用微生物的孢子、孢子和营养体；其次，根据它们的生理生化特性，人为地创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的新陈代谢，使其生命活动降低到极低水平或处于休眠状态，从而延长生命。菌株并保持菌株的原始性状以防止变异。无论采用哪种保藏方法，都要求菌种在保藏过程中不死亡、不沾染杂菌、不退化。

二、菌种保藏方法

1、低温定期移植保存法。将需要保存的菌体接种于合适的斜面培养基上，在适宜的温度下培养，待菌丝在斜面上长势旺盛时取出，置于3-5或低温干燥处保存。 4C 的冰箱或冰柜。 4-6个月移植转管一次，应根据菌种特性而定。存放时应注意环境温度不宜过高，以免霉菌通过棉塞进入管内。因此，如果使用卫生棉条，可以用干净的硫酸纸或牛皮纸将卫生棉条包裹起来，这样可以减少污染的机会，也可以防止介质变干。除草菇菌种外，其他食用菌菌种均可采用此法保鲜。

2、液体石蜡保存法。取化学纯液体石蜡（要求不吸潮不霉变）放入三角瓶中，加棉塞用纸包好，1kg/cm2压力灭菌1小时，然后放入40培养箱数日，蒸发其中的水分，直至石蜡油完全透明。将处理好的石蜡油转移至空白斜面，28-30孵育2-3天，待证实无杂菌生长后方可使用。然后将液体石蜡注入斜试管中，无菌操作保存。注射量应高出介质坡度1-1.5cm，用橡皮塞塞住，用固体石蜡密封，在低温干燥处直立保存。贮存期一年以上，低温下可延长贮存期。

3、砂管保存法。河沙用水浸泡数次，过60目筛除去粗颗粒，再用10%盐酸浸泡2-4小时，除去有机物，再用清水冲洗至自来水PH值达到中性，晾干备用。同时，将贫瘠的垄土或菜园土浸水调至中性，沉淀后弃去上清液，晒干研细，过100目筛，将处理后的沙土混合均匀与（2-4）:1 混匀，用磁铁吸出铁质，装入小试管或安瓶中，每管0.5-2克，塞上棉塞，用纸包好消毒（1.5公斤/cm2，1小时），然后干热灭菌（160，2-3小时）1-2次，进行无菌试验，合格后使用。在无菌条件下，向已形成孢子的倾斜菌株中注入3-5毫升无菌水，刮去菌苔制成菌悬液，然后用无菌吸管吸干菌液滴入砂管中浸泡沙子。直到土壤。将接种后的砂管放入装有干燥剂的真空干燥器中，接上真空泵抽气数小时，直至砂干。真空干燥操作应在孢子插入后48小时内完成，以防止孢子萌发。制好的砂管用石蜡封口，低温保存2-10年。

4、滤纸的保存方法。取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）滤纸，剪成40.8cm的小纸条，平铺于培养皿中，用纸包好灭菌（1kg/cm2， 30分钟） 。用钩悬法收集孢子，让孢子落在滤纸条上。将载有孢子的滤纸条放入保鲜试管中，然后将保鲜试管放入干燥器中1-2天，除去滤纸的水分，使滤纸的含水量达到2%左右，然后低温保存。

5、天然基质保存法

(1)麦粒保存方法：取没有瘪粒和杂质的小麦，洗净，浸泡12-15小时，加水煮15分钟，继续热水浸泡15分钟，使麦粒膨胀在不破裂的情况下，将水沥干并摊开晾干。使小麦籽粒的水分含量在25%左右。将碳酸钙和石膏混合入煮熟的麦粒中（麦粒、碳酸钙、石膏的比例为10公斤：133克：33克），拌匀后放入试管中，每管约2-3克，然后清洗干净试管、塞子棉塞，1.5（1.5 kg/cm2，2小时）灭菌，无菌试验合格后备用，冷却后接种试管基质，适宜温度培养。冷冻保存。每2年左右转移一次。

(2)麸皮保存法。取新鲜麸皮过60目筛，除去粗粮。按照1:1将麸皮和自来水混合，放入小试管中，每管高约1/3，用棉塞包好再用纸包好，高压灭菌（1.5kg/cm2，30分钟），并通过无菌测试供以后使用，将在倾斜培养基上生长的健壮菌株移植到无菌麸皮软管中。移栽时注意将小试管中的麸皮均匀捣碎，直至呈松散状态，并在适宜的温度下培养，直至菌丝布满麸皮，将麸皮管放入干燥器中保存它在低温或中等温度下。

6.生理盐水保存法。取纯氯化钠0.7-0.9克，放入100%毫升蒸馏水中，搅拌均匀，分装试管，每管5-10毫升，灭菌（1公斤/平方厘米，30分钟），通过无菌试验待用时，将待保藏菌种插入马铃薯葡萄糖液体培养基中，在适宜温度下摇床5-7天。无菌操作吸取少量培养菌注入合格生理盐水试管中，用无菌橡皮塞塞住，石蜡密封，常温或低温保存。

7、冷冻真空干燥法。将培养大量生长的细菌或孢子悬浮于灭菌血清、蛋清、脱脂牛奶中，制成菌悬液，分装于0.3 -0.5ml左右的无菌玻璃安瓿瓶中，用耐压橡皮管连接置于冷冻干燥装置中，将安瓿置于-30至-40的冷冻罐中快速冷冻，然后在冷冻状态下真空干燥，真空状态下密封安瓿，保存于- 20，一般可保存十年以上，但成本相对较高。

8、液氮冷冻保存法。首先，将待保藏的菌株制成菌悬液备用；其次，制备安瓿瓶，每瓶加入冷冻保护剂10%（体积比）甘油蒸馏水0.8ml，用棉塞消毒（1kg/cm2，5分钟）。无菌检查后，放入待保藏菌种，瓶口火焰熔化，检查是否漏气，将密封好的安瓶放入冷冻室，以每分钟1的速度缓慢降温，以便保存收藏