食用菌栽培种制备技术

随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需求量增加，但现有菌种生产单位数量明显偏少，不少食用菌种植户不得不从国外引进菌种。远距离采购和运输菌种，不仅成本高、成本高，而且菌种容易因破瓶造成细菌污染，严重影响种植食用菌的经济效益。如果食用菌种植者能够掌握菌种的生产程序和制种技术，进行制种自产，逐步发展成为专业制种户，也是一个很好的致富途径。

菌种生产程序通常分为母种、原种和栽培种三个层次，通常称为一级、二级和三级菌株。其中，母种的分离繁育技术性强，需要精细化；而原种和栽培种的生产相对简单。下面介绍各级菌株的生产技术。

1. 母种分离育种

母种主要通过人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质体融合等方法获得。作为一般制种专业人士，可以采用人工选育的方式，对母种进行分离培育。具体步骤和操作方法如下。

1、种源采集：从野生和人工培育的种群中，选择具有代表性的优良菇体作为种源。种植蘑菇的标准是：8成熟，花形圆润直立，肉厚，无病虫害。采集符合上述标准的籽菇1--2个，编号作为分离母种的材料。从培养室采集的，应标明原菌种编码。

2、培养基配制：琼脂培养基又称PDA培养基，常用配方为：土豆200-250克，琼脂15-20克，葡萄糖20-25克，水1000毫升。也可加入1-1.5克硫酸镁、少量维生素B1、2-3克磷酸二氢钾。先将土豆洗净去皮，切成薄片，放入铝锅中加水煮30分钟，捞起用4层纱布过滤取汁。然后在汁液中加入琼脂，边加热边搅拌，让琼脂充分溶解；再加入葡萄糖等，煮几分钟，用4层纱布过滤取汁。趁热将果汁倒入玻璃试管中。加至管长的1/5，用棉花塞紧管口，或将汁液倒入容量为20毫升的玻璃三角瓶中。然后放入高压锅中，在98--108 kPa/cm的压力下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出，趁热将试管斜放在台面上，冷却后成为固体斜面培养基。

3、母种分离法：有3种方法：孢子喷射法、组织分离法和基底分离法。 孢子喷射法。种菇表面消毒吸水后，将菇体悬挂在盛有琼脂培养基的三角瓶中，让菇体内的袍子自然散落在培养基上，使菌丝萌发。也可以将菇体剪一小段，贴在试管斜面上的培养基表面，让孢子散落在培养基上，使菌丝发芽，然后母种可以获得； 组织分离法。将灭菌后的种菇从接种盒中的菇柄上用手对半解开，或用刀片切开，使菇体形成裂口。在菌盖与菌柄连接处或菌褶处，用接种刀切一小块菇体，再纵切成5mm10mm的小片，用接种针挑出一薄片，并将其插入斜面培养基中。中央各试管接种一小片薄片，菌丝萌发后即得母种； (3)基底内分离法。选用长出蘑菇的木段，切去树皮和表层木质部，用70%酒精消毒，锯成1厘米厚的薄片，放入0.1%汞升水中1-2分钟，消毒后用水对其进行消毒。用水冲洗以去除残留物。然后将小片分成0.5--1厘米宽的条状，插入斜面培养基中央，菌丝长出后即得母种。也可以用接种钩在消毒后长出蘑菇的菌袋中取出颜色纯正、生长旺盛的菌丝，接种在试管斜面上的培养基中央。菌丝体发芽后，即为真菌类。

4、适温培养：采用上述不同方法分离菌种接种于试管后，应及时将试管移入已灭菌的培养箱或培养室进行培养，并控制温度25左右，使分离得到的孢子或菌丝能在适宜的温度下生长。一般孢子排出3-4天后萌发成菌落，10天后菌丝长满管；组织分离接种后2-3天，菌丝在培养基上萌发蔓延生长；菇木分离接种后，7天后菌丝恢复生长。

5、选育提纯：用上述方法得到的菌丝不一定是优质的，还需要进行筛选提纯。因此，菌丝萌发后，仔细观察，选择菌丝颜色纯正、健壮、生长正常、生长不间断的菌丝，将菌丝连同接种盒中的培养基一起钩好，插入另一试验的培养基中管子。在23--25恒温条件下培养7--10天，待菌丝长满管后，观察选出最好的，即为“母代”母种。

6、转移管扩：可将母种转移到“子”母种。使用相同的斜面培养基，每个分枝可扩展到30--50个后代母种。生产中的大部分供应是后代母种。它可以再次扩展。一般每个分枝可扩成20--25个后代和母种，但转管次数不宜超过5次。

7、菇出菇试验：分选育种的母种也必须进行出菇试验。其方法是：将母种接种在瓶装或袋装的木屑培养基上，根据各种菌种对温度的要求进行适宜的温度培养，直至出菇即可。

2. 原种繁育与训练

将母种接种在瓶或袋中的木屑培养基上，培养成为原种。其技术要求如下。

1、原木屑培养基配方：杂木屑77.5%、麦麸20%、蔗糖1%、石膏粉1.2%、硫酸镁0.3%。 pH值（灭菌前）为6.5--7，含水量调至60%。

将上述原料和辅料混合均匀，装入750毫升玻璃种子瓶中，按要求松紧。将瓶口处的棉花扎紧，然后用牛皮纸包住瓶颈和卫生棉条。然后放入高压灭菌器中，在147kPa/cm2压力下灭菌2-2.5小时。也可常压灭菌，100保温10--11小时。达标后，趁热取出，放凉。

2、插株：待料温降至25以下，灭菌条件下，将试管种分成数段，通过酒精灯火焰快速插入原种子培养基中。原种4--6瓶。

3、细菌培养：接种后，将玻璃菌瓶及时移入25的培养室进行培养。空间相对湿度控制在70以上，避免强光照射。原种栽培时间一般香菇需要40-50天，而草菇、银耳只需15-20天。

4、剔除杂种，择优：在原种培育过程中，需要每天对种子进行观察。

　　三、栽培种扩大培育

　　将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培养30--35天即为栽培种（又叫生产种），可用于生产栽培。栽培种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米×24厘米、15厘米×28厘米、17厘米×33厘米等，可根据各种菇耳特性和当地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌，要求灭菌温度达100℃，保持8--10小时，达标后趁热卸袋冷却。待料温降至25℃以下时，在无菌条件下接入选定品种的原种。每瓶原种可扩接成50--60瓶栽培种。菌种培育室要求干净，防强光，室温掌握在23--25℃，并经常检查，发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋，尖端菌丝反转上爬1--3厘米时，为适龄的栽培种。