蛹虫草菌种选育与复壮技术

掌握成熟的菌种选育和复壮技术是实现蛹虫草标准化栽培的前提。

1、菌种选择

一般采用组织分离法进行菌株选择。该方法具有操作方便、菌丝发芽快、能保持原菌优良种子性状的特点。

(1)选择优良菌种。从田间或室内选出第一批生长旺盛、大小适中、无病虫害的优良蛹虫草菌种8株。

(2)消毒。新鲜北虫草用清水洗净，去除表土，用75%酒精浸泡35秒，用无菌水冲洗23次，再用0.1%汞升水溶液消毒13分钟，冲洗干净用无菌水浸泡3 分钟。 ~5次，洗净分离。从室内挑选的菌种只需用酒精消毒，用无菌水冲洗即可。

(3)分离。将蛹虫草顶部组织的子实体呈龟状纵向剪开，用尖头镊子取里面的白色组织块，取绿豆粒大小的组织接种在消毒过的菌体中间。倾斜介质。

(4)培养。将接种好的斜面培养基置于培养室内进行培养。培养室消毒避光。保持培养室温度在25左右，空气湿度在60%左右。经常检查以清除污染并培养5 至10 天。对菌种进行培育，选择性状优良的菌种作为母种。

(5)优良菌种标准。白色菌丝粗大，紧贴培养基呈匍匐状生长，边缘整齐，很少有气生蓬松菌丝，菌丝见光呈橙色。

2. 菌株纯化

(1)消毒。将优良母种和灭菌后的斜面培养基试管放入超净工作台。先用肥皂洗手，然后用75%的酒精棉球擦拭双手和应变管表面，在酒精灯的火焰上燃烧消毒。

(2) 传输管。转管时，双手从接种孔伸入超净工作台，用75%酒精棉球擦拭接种环。左手握住培养管和斜管，将两支试管的开口对准火焰上方。右手握住接种环，在酒精灯的火焰上干热灭菌。用小指和无名指拉出卫生棉条，使卫生棉条底部朝外。接种环冷却后，伸入应变管中，取黄豆粒大小的菌丝块和稀薄的培养基，迅速移入倾斜培养基的中间，菌丝朝上。然后，将棉塞放在火焰上烧一下，立即插入试管口，拧紧棉塞。

接种环不要接触管口和管壁，以防感染。在合适的温度下培养约5至10天。

3.草地实验

纯化后的菌株在无菌条件下接种到培养基上，在培养室中培养。在温度18-22、湿度适宜的条件下培养20-30天，形成橙红色子实体。

4.应变回春

菌种繁殖应在无性繁殖和有性繁殖之间交替进行，否则菌种性状容易退化，表现不规则、畸形，甚至无杂草。因此，在生产过程中，应及时对菌种进行有性繁殖，进行提纯复壮。

(1)消毒。选用高产、优质、早熟的蛹虫草子实体进行消毒。

(2) 疫苗接种。灭菌后的子实体悬浮在充满PDA培养基的无菌锥形瓶中。

(3)培养。接种后的锥形瓶在25左右的无菌室中培养1天。当锥形瓶培养基表面出现大量白色蛹虫草菌丝时，在超净工作台上挑出单个或多个菌体。将蚕丝接种于带有接种环的试管斜面培养基中间进行培养。当蛹虫草的菌丝覆盖坡面时，它又被净化了。获得的母种通过除草试验后，选择优质的蛹虫草子实体，然后采用组织分离法培养，获得的母种可作为栽培种进行繁育。