灵芝原种和栽培种生产技术要点

(1) 成分

参照上述培养基配方，按照低成本、易得、节约资源的原则，选择原始或栽培的培养基配方。

(2) 配料包装

根据当天的生产计划，配料按配方配比称量。先将干料（蔗糖除外）搅拌均匀，然后逐渐加水（蔗糖溶于水）继续搅拌，直至培养基含水量达到要求，即可分装。为保证菌种质量，应选用无色或浅色透明的750ml菌种瓶作为原种（二级菌种）生产的菌种容器。生产灵芝品种（三级种），可采用15cm*30cm*0.055mm（长*宽*厚）PE袋（适合常压灭菌）或PP袋（可高压灭菌）用作菌株容器。

装瓶时，一边将物料倒入瓶中，一边用手捏住瓶颈，不断震荡，直至物料灌满瓶口。用扁铁钩将表面压平，然后用力压在瓶肩上。如果用塑料袋包装，用力均匀，轻拿轻放，以免损坏塑料袋。堆肥要上紧下松，松紧适度。如果瓶子太紧，瓶子里的空气就会少，影响菌丝的生长。如果太松，虽然细菌生长快，但菌丝少，容易收缩。洗净瓶口内外残留的木屑、麦麸等培养物，稍干后，套上棉塞，或用聚丙烯薄膜、牛皮纸包住瓶口。料袋可以用塑料圈和透气塑料盖封口，也可以用封口机封口（类似火腿肠的封口工艺）。装满物料的瓶（袋）称为料瓶（料袋）。

(3)灭菌

将料瓶（袋）放入灭菌器内。杀菌方法有两种：一种是高压蒸汽杀菌，一种是常压蒸汽杀菌。少量原种和栽培种可用便携式消毒器进行消毒，但每次只能消毒10瓶左右。如果大量生产原种和栽培种，必须使用大型杀菌机进行杀菌。常压蒸汽灭菌污染率高，菌种的生产最好使用高压灭菌器（具体灭菌方法详见灵芝健康网）。

(4)冷却

灭菌后的瓶（袋）可在专门的冷却室或接种室进行冷却。降温部位必须提前24小时消毒。当堆肥温度降至30以下（明显低于手掌温度），即可进行接种。接种前应进行无菌培养试验，检测灭菌效果。

（五）接种

根据无菌操作要求，将母种或原种移栽到灭菌后的培养基中称为接种。原种和栽培种的接种方法相似，不同的是原种插入母种，栽培种插入原种。由于打开试管或菌瓶可能导致容器内部被环境中的其他微生物污染，因此所有接种操作均应在接种箱（室）或超净工作台内进行。接种箱和接种空间使用前应消毒。先用每立方米空间4克烟雾消毒剂（二氯异氰尿酸钠），隔夜消毒。接种所有准备工作完成后，接种前4小时，每立方米空间使用4克烟雾消毒剂，然后进行二次消毒。母种接种原种时，在无菌条件下，将接种针置于火焰上方充分燃烧冷却，然后在酒精灯火焰附近拔出试管棉塞，钩一小块母种带培养基，可将母种斜面剪成6-8段，去掉顶端，其余部分连同培养基与原种子培养基相连。

原种移栽栽培种时，在无菌条件下，将扁形接种钩或接种铲置于火焰上方充分燃烧冷却，然后在酒精灯火焰附近拔出试管棉塞，并丢弃瓶口附近的原始种子。原种表面约3厘米，减少栽培种的细菌污染。然后将适量的下层菌种移植到品种堆肥表面，一瓶原种可转50-60瓶该品种。

瓶（袋）虽经蒸汽消毒，但在搬运过程中，瓶（袋）壁会沾染细菌。接种时一旦打开瓶（袋），操作人员的气流和呼吸气流就会感染菌体，使附着在瓶壁上的杂菌污染料瓶（袋）。因此接种时要求严格无菌操作，接种操作规范、整洁，以降低污染率和成本。堆肥接种后，用棉塞塞住或盖上瓶盖，移至恒温室或培养室培养。

(6) 培养

原种和栽培种接种后置于培养室，接种后的菌瓶（袋）移至恒温室或培养室培养。搬家前，打扫培养室，保持环境清洁，并在转移病菌前提前消毒。瓶（袋）。保持培养室温度在25左右，空气相对湿度在60-70%。避光、强通风。菌种培养初期严格每2-3天检查一次，待菌丝体覆盖培养基表面后每7-10天检查一次。如果在瓶壁、表面或接种块上发现红色、绿色、黄色和黑色的孢子，说明有其他细菌污染，如红色脉孢菌、青霉菌、曲霉菌或根霉菌，应予以清除。如果检查时间间隔过长，杂菌菌落可能被旺盛生长的食用菌菌丝覆盖，造成无形污染。由于塑料袋制种体积较大，放在培养架上时不要挤压，翻动也不宜过于频繁，以免损坏菌丝或损坏塑料袋。栽培室内栽培架之间用木条相互支撑，避免倾倒事故。

在适宜的环境条件下，一般培养20-40天后，菌丝即可膨大蔓延至整个堆肥，培养7-10天后，即可用于转栽培或用于生产。配制好的菌种如暂时不用，可在阴凉、干燥、通风、避光、洁净的室内短时间保存，以保证菌种质量。即使低温保存，也不宜存放时间过长，以免菌体老化，活力下降，导致接种后发芽缓慢，易感染杂菌。