北虫草菌种人工分离的研究

l 材料与方法1.1 材料试剂与仪器1.1.1 供试菌株为沉阳棋盘山野生蛹虫草菌株。 1.1.2 培养基加入马铃薯100 g、葡萄糖10 g、牛肉膏5 g、KH2PO4 0.5 g、MgSO4 0.25 g、琼脂10 g，加蒸馏水至500 mL，煮沸使琼脂完全溶化， 1210灭菌30分钟。 1.1.3 试剂75%酒精、无菌水。 1.1 4 主要仪器便携式压力蒸汽灭菌器、分析天平、超净工作台、HPX-9082MBE数显电热培养箱、其他常用玻璃仪器等1.2 测试方法1.2.1 不同组织部分分离方法比较（一）子实体分离法将冬虫夏草子实体在超净工作台上用75%酒精浸泡1分钟，用无菌水漂洗3次，然后用小刀将子实体顶部、中部和根部切掉体，接种于斜面培养基上，18。C恒温培养15天。观察不同组织部位对蛹虫草萌发天数、生长天数和满管时间的影响。 (2) 孢子分离法将上述方法得到的子实体洗净，用小刀切下尖端，挂在锥形瓶棉塞下端的不锈钢挂钩上。悬挂冬虫夏草的子实体，使顶部朝下。分散的孢子落在培养基上，从而继续生长并产生白色菌丝。栽培初期，要保证室温不能过高。因此，在本实验中培养时，将三角瓶放在盛有冷水的盆中，每天需要换水，以保持较低的水温。 18孵育5 d后。在无菌条件下取出子实体的尖端，将三角瓶放回，继续培养10天。 1.2.2 不同消毒方法比较以子实体顶部为例，处理方法见表1。接种于斜面培养基上，18培养15天。观察不同消毒方式对蛹虫草发芽天数、生长及满管时间的影响。 1.2.3传代试验选择生长良好的分离菌株，接种到玻璃瓶中，将玻璃瓶放入培养室进行培养。 2 结果与分析2.1 组织分离法分离蛹虫草的研究2.1.1 不同组织部位对蛹虫草发芽天数的影响消毒法灭菌。可以看到，在培养初期，在培养顶部和中部的试管中，蛹虫草的两端均有白色菌丝生长。然而，在培养根部的试管中，没有白色菌丝生长（净1）。 2.1.2 不同组织部位对蛹虫草生长的影响有无匍匐菌丝可作为判断菌丝质量的依据，数量越多，菌丝品质越好【3_随着培养时间的延长，3个不同部位的蛹虫草试管中均产生白色菌丝，生长无差异。 2.13 不同组织部位对满管时间的影响经过几天的培养，蛹虫草三个不同部位的菌丝均未出现明显的满管现象。 2.1_4 孢子分离法分离蛹虫草的研究孢子分离法培养初期如图2-A所示。培养2天后，培养基上形成少量菌丝（图2-B），培养5天后，培养基上已形成大量菌丝（图2-C）。此时在无菌条件下取出子实体，继续培养10天。在发芽时间和生长势方面，孢子分离法获得的菌株质量较好。 2.2 不同消毒方法的影响2-2.1 不同消毒方法对蛹虫草发芽天数的影响两端也形成，未用酒精处理的菌丝（1号和2号）发芽较早，发芽旺盛。 2-2-2不同消毒方式对蛹虫草生长的影响未经酒精处理的两组菌丝生长较好，有明显的匍匐菌丝。酒精处理的三组生长正常，后两组仍无菌丝。失去体力活动。 2_2.3 不同消毒方法对蛹虫草满管时间的影响未经酒精灭菌的2组（1号和2号）蛹虫草菌丝体，培养8天后，菌丝覆盖了整个试管，而其余各组均无满管现象。

2.3 传代验证孢子分离法分离的菌株，即传代后获得的冬虫夏草子实体（图3），色泽好，产量高，证实了孢子分离法分离的菌株质量较好。一个结论。图3 孢子分离法分离菌株继代培养获得的虫草子实体3 结论与讨论3.1 结论通过实验可以得出，首先，靠近子实体顶部分离的菌株易于发芽，从孢子中分离的菌株是容易发芽其次，北虫草的子实体具有抗菌作用，因此，在选择表面消毒方法时，一定要适当，时间不宜过长，以免对子实体造成伤害。不产生菌丝。 3.2 讨论目前，国内对蛹虫草的研究较多，但大多涉及种属资源的分类和分布，栽培和生产方面的研究报道较少。这种真菌的生物学特性和遗传特性尚未完全阐明。在菌种组织分离和获取实验中发现，通过切割子实体顶部组织呈龟纹状获得的菌种特性优良，产量高。北虫草菌株转管次数增加，子实体产量下降，生产中该菌株转管次数不宜超过3次。