灵芝菌种的分离与育种的标准

灵芝菌种的分离方法有组织分离法、孢子分离法和基质中菌丝分离法三种。分离菌丝在基质中因易污染，较少采用。孢子分离法多用于研究和菌种复壮。规模化生产采用菌丝与子实体分离的方法，操作简便，能保持原菌的优良性状。 (1)子实体菌丝分离法

选择形态正常、无病虫害、无喷出孢子、菌盖边缘尚有黄白色子实体生长的灵芝子实体。进行表面擦拭消毒。剪去菌柄基部，在菌盖中间用单面刀片或手术刀切下一块米粒大菌肉，斜面放入培养基中央的试管。可以分离出更多的试管供选择。将试管置于26~28的恒温箱中。培养2~3天后，可见菌肉上长出少量白色棉状菌丝。 78天后，菌丝即可长满坡面。洁净洁白的试管作为实验和生产的菌种，通常称为第一代母试管，可冷藏保存，便于转移。

未形成菌盖的幼柄也可作为隔离材料。

(2)孢子分离法

取发育正常、健壮、已开始喷出孢子的灵芝子实体。剪下菌柄，在无菌条件下用0.1%汞升水或75%酒精消毒表面，用无菌水冲洗数次，然后用无菌棉擦拭干净。将菌管朝下置于灭菌培养皿中，盖上用75%酒精擦拭过的玻璃罩。 25-30 5-6小时后，孢子散落在培养皿底部，用接种针挑起。取少量孢子置于试管内斜面培养基中间，移入培养箱培养。分离所用培养基可以是普通马铃薯培养基、麸皮提取物培养基等。

孢子分离法污染率高，被细菌污染的试管应及时检查并丢弃。当孢子萌发和菌丝萌发时，应及时用少量培养基挑出，吸取。

可将子实体切成蚕豆大种子块，用消过毒的铁钩固定后，放入瓶底有1厘米培养基的三角瓶中，用棉塞塞住。当孢子喷出，菌丝萌发时，及时转管。

在田间分离灵芝孢子时，由于条件所限，可将菌肉（携带管）粘贴在试管壁上，孢子弹注入培养基后及时转管。

孢子萌发后，先形成初级菌丝，数日后可形成次级菌丝。如果在显微镜下观察到锁节，一般可以确定已经获得了灵芝菌丝。

(3) 基质内菌丝分离法

这是一种利用灵芝生长基质作为分离材料，获得灵芝菌种的方法。优点是当灵芝子实体老了时，仍可得到灵芝的纯菌丝体。但子实体生长时，基质中的灵芝菌丝体并不是单独存在的，往往与细菌、放线菌、霉菌等真菌一起生长。为获得纯正的灵芝菌丝体，分离时应注意分离材料的选择，以灵芝菌丝体生长良好、菇木未腐烂为分离材料。分离时，接种块尽量小，分离出的菌株经出菇试验确认为优良菌株后，方可用于生产。