猪苓纯菌种的分离培养

一、脐猪纯菌株的分离培养脐猪苓菌株与其他菌株一样，都是通过菌种分离（组织分离、孢子分离）得到的。一般分离野生或家养猪苓菌核种或利用夏雨获取菌种。高温高湿天气过后，采集猪苓（俗称“猪苓花”或千层菇）的子实体，进行组织分离和担子孢子分离。 1.1 母种分离1.1.1 培养基的制备PDA培养基或麸皮葡萄糖培养基均可。 PDA培养基：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂12-15g，水1000mL，pH 5.0-6.0。 麸皮-葡萄糖培养基：麸皮50g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1.5g，琼脂12-15g，水1000mL。 1.1.2 分离方法1.1.2.1 组织分离方法包括菌核分离和子实体分离。菌核分离：猪苓子实体的采集受季节和天气的影响不便。菌核分离多用于获得菌种，洗净菌核表面。清洗干净，用75%酒精消毒后，切开菌核，中间取一块黄豆粒大小的组织，在无菌条件下接种于试管斜面上，15适宜温度培养-20，产生菌丝进行分离纯化。子实体分离：分离子实体内部组织是获得优质菌株的最佳途径。选七到八个性状优良的成熟子实体作为种菇，用无菌水漂洗数次，用无水滤纸吸干，然后撕开种菇，用消毒过的小刀将连接处的菇清洗干净。从菌盖和菌柄或菌鳃上切下一小块组织，用接种针将组织置于装有培养基的试管斜面中间，在适宜温度下培养。当菌丝在组织块上产生并在培养基周围生长时，可挑斜面将上层菌丝的生长点转移纯化。 1.1.2.2 孢子分离法孢子分离选择成熟度高、孢子分散的子实体作为种菇。通常采用钩悬法分离孢子。用经过消毒的不锈钢丝打褶、悬挂在三角瓶（或广口瓶）中的培养基上方，使其不接触培养基和周围的瓶壁。将瓶子置于20C 的培养箱中进行培养。当成熟的孢子落在培养基上时，立即在无菌条件下取出鳃。孢子继续在瓶中培养。菌丝长出后，转移到试管中培养。猪苓的分离与栽培。必须与组织分离和孢子分离交替进行，且至少每三年进行一次孢子分离以恢复其物种。据笔者调查，猪苓长期无性繁殖是导致猪苓减产的主要原因之一。 1.1.3 菌种的纯化和培养最初在平板培养皿或试管培养基上分离的菌种，经选择后进行纯化和培养，得到品质优良的纯菌种。菌株的纯化操作也是在无菌条件下进行的。当猪苓在培养基上产生并排菌丝时，立即用接种针挑出旺盛的菌丝芽尖部分，置于倾斜试管的培养基中央。 20恒温培养10天左右。当菌丝覆盖整个培养基时，就是纯菌种，即母种。 1.2 栽培原种和栽培种原种基本配方：杂木屑78%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏1%，水分55%60%。获得母种后，一般制种者可制作猪苓原种，由于猪苓菌丝生长缓慢，菌丝细长，宜用透明玻璃瓶制作原种，以供观察和观察。去除杂质。栽培品种配方由杂木屑58%、树枝20%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏1%、水分55%60%组成。用12cm28cm的聚乙烯袋或聚丙烯袋为材料，在介质中加入粗1-2cm、长2-5cm的小树枝，每袋可加入20-30根树枝。用木屑填充空隙。原种和栽培种必须在严格的无菌条件下进行彻底灭菌和接种。在培养过程中，应检查和挑取杂菌菌株，为生产提供优良菌种。