如何提高制作母种培养基的质量

制种是食用菌生产的关键环节，菌种的好坏直接影响食用菌的产量和品质。菌株的质量取决于许多因素，如培养基的制备、种源的质量、接种技术、储存条件等。根据菌种培养的不同阶段，可分为母种、原始种和栽培种三类。母种品质的好坏直接影响原种和栽培种的品质，因此各种影响因素对母种品质的控制尤为重要。母种培养基的制备看似简单，但要做好却并不容易。现在有很多修炼者自己做母种。由于生产规矩松懈，容易出现问题，又由于缺乏系统的专业知识，出现问题得不到解决，造成菌种污染和损失。现通过生产过程中的一些注意事项，说明如何提高母种生产培养基的质量，希望能为从事菌种生产的技术人员和食用菌栽培人员提供参考和帮助。马铃薯培养基（PDA）适用于多种食用菌菌丝的生长，PDA主要用于配制母种培养基。现以PDA为例说明母种培养基制备中的一些注意事项。在PDA的生产过程中，一般分为备料、培养基制备、培养基包装、灭菌、冷却五个步骤。下面分别说明各步骤的注意事项： 1 材料准备1.1 注意选择马铃薯时，应选择无芽、无绿点的马铃薯，因为马铃薯芽中的毒素会影响菌丝的生长。在此过程中，马铃薯会发芽，发芽的芽可以完全去除重复使用。 1.2土豆去皮后，一般切成0.2cm厚的薄片，因为土豆片的大小和厚度会同时影响烹饪效果。如果土豆切得厚一点，煮的时间短一点，都会影响土豆。获得的营养液量反过来会影响培养基的质量。一般0.2cm厚的土豆片的烹调时间控制在10分钟以内为宜。 1.3 培养基的制作，使用琼脂条或凝固用的琼脂粉。考虑到实际操作中的成本问题，常使用琼脂条，但琼脂条加热后不易融化。融化的琼脂条会影响培养基的凝固效果。解决方法是将称好的琼脂条提前用热水浸泡，使琼脂条充分吸水软化，便于加热融化。注意事项：夏季配制培养基时琼脂条的用量可增加2-4g，便于高温凝固。 1.4 煮土豆片前注意加水量。以1000mL为例，烹调前加水1200-1300mL。由于在烹调过程中水分会不断蒸发，部分水分会流失，所以在烹调之前。加入200-300mL 蒸发损失的水。这样就避免了因蒸煮后水分不足而加入清水造成营养液稀释的现象。 2 培养基制作2.1 将切好的马铃薯片加入1200-1300mL水中，先用旺火煮至锅沸，然后计时，再用文火煮10分钟，熄火，冷却，过滤。注意定时后用文火烹调。不要盲目认为大火烹调会把土豆中的营养成分全部煮掉。不利于过滤。注意炖的时候，水稍微沸腾即可，盖上锅盖，防止水分大量流失。 2.2 煮土豆汁用4层纱布过滤，注意至少用4层纱布过滤，目的是充分滤出煮土豆营养液，排除其他杂质。用纱布滤出1000mL以上的营养液，1000mL以上是为了弥补琼脂融化过程中水分蒸发的不足。 2.3 琼脂加热融化阶段，加热融化时注意不要加热过快。用玻璃棒边搅拌边融化琼脂，以免琼脂沉到锅底粘锅。加热至沸腾时，转小火继续加热搅拌至不能用玻璃棒从锅底挑出未溶解的琼脂为止，留1000mL营养液。 3 培养基分装3.1 预先准备好用于分装培养基的试管，注意：试管必须擦洗干净（有条件可用食物或其他清洁方法清洗）、倒置、沥干；不要密闭，密闭的容器不利于水分流失（可能的话，可以放在烤箱里烘干）。

如果试管内有残留水分，会造成灭菌试管内水分过多，影响接种和发芽。 3.2 分装培养基时，一定要在培养基温度高的时候装满，不仅分装速度快，而且培养基不易凝固。分装培养液时，一般采用医用胶管将培养液导入试管内。注意将橡皮管插入试管一定距离，不要接触管口或将培养液粘在管口上。一般试管的液体体积占试管体积的2/5。当试管放置在该容量的斜面上时，斜面过短不会影响试管的利用率，斜面过长接触不到试管会增加污染的机会。卫生棉条。 3.3 将分装后的试管冷却，用卫生棉条密封。尽量使用新的卫生棉条。用过的卫生棉条受潮后容易滋生细菌。制作卫生棉条时，注意将卫生棉条由内向外包紧，不要松散，将做好的卫生棉条插入2/3的管口，留1/3在管口外。将卫生棉条从喷嘴中拉出并听到砰的一声。注意，在插入卫生棉条之前，应将喷嘴口擦拭干净，不能有残留的培养基。灭菌后，残留的培养基不仅会粘在管口使卫生棉条拔不出来，而且管嘴口也会使培养基容易被细菌污染。 3.4 灭菌前，试管用牛皮纸包裹（7管/把）。牛皮纸是最理想的灭菌包装材料，可以重复使用。很多农民在做试管的时候，为了降低成本，一般都会用报纸包裹。包报纸时建议使用双层报纸包装，因为报纸在消毒时容易吸水破裂，使卫生棉条暴露在空气中，增加污染。可能性。如果试管作为菌种保存，不建议用报纸包起来，因为报纸在0-4的低温冰箱中保存时，很容易吸收冰箱中的水分，造成管口处的棉塞要受潮，这样会增加污染的机会，缩短存放时间。 4 灭菌4.1 现在很多养殖户常用高压锅代替自己制作试管培养基。掌握高压锅杀菌的准确性并不容易。常规医用灭菌器。 4.2高压蒸汽灭菌是利用蒸汽在高压下的穿透力来达到灭菌效果，所以

　　4.3  在锅盖密封时注意，不要将螺丝逐个上紧，要把每个螺丝卡好，以相对方向的螺丝平衡用力拧上，注意不要太紧，所有螺丝拧好后再用力将相对的螺丝平衡用力拧紧。这样做不但可以将锅盖密封紧密而且还可以避免漏气现象发生，延长高压锅的使用寿命。

　　4.4  灭菌过程中的放气是至关重要的，放气阀紧连的金属管直通到内胆底部，目的就是在放气时将底部空气完全排净，若排不净空气，空气自身产生的压强会占据压力表上显示的总压强，降低水蒸气产生的压强，误认为灭菌锅内的灭菌压强已达到灭菌要求，最终造成灭菌不彻底。所以在排气时注意大火加温至压力表指针达到0.05Pa时打开放气阀放气，待指针降下来后重复上述操作直到放气阀喷出大量雾状水蒸气为止。

　　4.5  放完气后继续加热待指针指到121℃或0.12Pa时，通过断电或停火让指针维持不变计时30min，注意在维持压力计时时一定要留有专人看管，切忌灭菌时一心多用，严防压力过高造成危险。

　　4.6　计时完毕后，停止加热让高压锅自然冷却，冷却至0.05h以下即可放气，注意放气时应轻提放气阀，不要猛提放气阀，由于锅内压力过大会造成水蒸气外喷范围较大，要谨防烫伤操作者。还应切忌当压力还未降至0.05h而打开放气阀，不但会有烫伤的危险，更重要的是产生的巨大压差会使试管内的培养基沸腾，造成培养基外溢污染棉塞，严重者试管会在锅内爆裂。

　　5  冷却

　　5.1  当压力表降至0时，待锅体略微冷却，拧开螺丝打开锅盖，注意不要将试管立即拿出，由于锅内水蒸气含量较大，试管内及棉塞含水量也较大，直接冷却会导致试管内有冷凝水及棉塞含水量过大，影响接种、发菌，还会加大管口处污染的机率。打开锅盖后，让锅内大量的水蒸气散发将试管内及棉塞中的水气带走一些，直到包裹试管的纸张见干时即可拿出摆斜面。

　　5.2  摆斜面的环境要求洁净，因为斜面摆放环节是高压灭菌和无菌接种之间试管培养基与环境接触的中间环节，为降低.试管培养基污染的机率，摆斜面的环境要求洁净、定期灭菌。

　　5.3　摆斜面时要趁培养基未凝固前摆放，注意摆放前要朋试管倾斜一定角度旋转一周将试管内壁上附着的水珠溶于培养基内，降低冷却后试管内的含水量。

　　5.4  摆放时将管口垫起一定高度，使试管内的液体培养基倾斜，斜面长度可占试管长度的3/5，注意不要将斜面摆的过长、距离棉塞过近，因为菌丝在生长过程中接触到棉塞会极易污染杂菌。

　　5.5  如果制作的试管培养基是为了保存菌种，摆放斜面时注意要让培养基充分填充试管半球状的末端，目的是延长试管菌种的保存时间。

　　5.6  注意在用制作好的试管培养基接种前要检查试管培养基的灭菌效果，这一步非常关键。夏季温度较高，斜面培养基放置12h即可；冬季温度较低，斜面培养基要放置24h，有条件可放入恒温箱内12h。将放置好的斜面培养基对着光源观察培养基斜面，若斜面光滑证明灭菌彻底无杂菌污染，若斜面不光滑（有细菌状、霉菌状等）表明灭菌不彻底，需要重新灭菌。

　　以上是在实际制作母种培养基中总结的几点注意事项，通过了解制作母种培养基的每个步骤和注意事项，希望能对从事菌种制作的技术人员和食用菌栽培户有所借鉴和帮助。