北虫草液体菌种制作方法

1、培养基配方：1%玉米粉、2%葡萄糖、1%蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%磷酸二氢钾、95.35%水、0.05%硫酸镁、10mg维生素B1，调PH值至6.5左右。二、制作及培养方法1、一等摇瓶的制作：将上述原料用水溶解后，放入500毫升锥形瓶中，每瓶装有200毫升玻璃珠，用棉塞塞紧。然后用4层纱布盖住棉塞，将瓶口扎紧，放入高压灭菌器中消毒。当压力表上升到0.5kg/cm2的压力时，松开空调，直到指针降到0，然后关闭瓶口。关闭放气阀，待温度计指针逐渐上升到1.1kg/cm2，开始保温30分钟，然后慢慢将指针降到0，然后打开盖子冷却至室温，然后移入接种箱或超净工作台等待接种。 2、接种方法：先将灭菌后的蛹虫草液体培养基放在超净工作台上，将蛹虫草亲本、接种钩、酒精灯、酒精棉球等接种物品放在超净工作台上.洁净工作台上，接种室悬挂工作服进行消毒。然后在接种室内点燃气雾剂（最好使用臭氧消毒器），立即关闭所有门窗进行密闭消毒，同时打开紫外线灯。 40分钟后，将烟雾熄灭，关闭紫外线灯，接种人员即可开始接种。接种方法是穿上工作服，打开超净工作台风扇，点亮酒精灯，左手持母种试管对准火焰口，手握铁钩右手酒精灯火焰消毒3-5秒后立即插入母种。将菌种在种子试管中分成5-7份，然后左手快速打开纱布瓶盖，右手立即将菌种钩入瓶中（0.5平方厘米菌种5-6种在每个瓶子中）快速将瓶子按原样盖紧。蛹虫草菌种接种后，移入22-24恒温培养室，摇动摇床开始培养。摇床转速为140r/min。菌培4-6天后，蛹虫草菌液颜色开始变清澈，菌球密集，瓶口有浓烈的蛹虫草气味，即可判断为一个很好的应变。如果发现瓶内含菌浓度低，有异味，有五颜六色的菌液，说明有细菌污染，切不可使用。 3、制作二级摇瓶：培养基同级，用5000ml三角瓶，容量2000ml蛹虫草液体菌种，灭菌冷却后，将一级摇瓶种入大摇瓶按10%无菌操作，22-24，140r/min振荡培养72小时，菌球大小均匀，密度80%以上，菌液澄清，气味芳香，而且没有污染，是合格的菌株。由于5000ml大摇瓶体积较大，无法放入便携高压锅，用大锅太浪费了。为解决大摇瓶灭菌难题，华山食用菌研究所研制出100升立式电加热自控高压灭菌锅，一次可灭4个5000个大摇瓶。同时研制出可同时摇动5-7瓶5000ml大三角瓶的摇床，轻便、无噪音、能耗低。 4、菌种稀释：配制好的虫草菌液菌种在接种前需要进行稀释，以扩大接种规模。稀释倍数根据接种平板数稀释5-8倍。用稀释罐稀释时，按液罐洗消和实际洗消操作规程进行： （一）发酵罐洗消（内罐、过滤器、管路消毒）是对发酵罐设备进行灭菌的过程。一周未使用或空压机（气泵）因停电停运，需对发酵罐进行除污操作。具体操作方法： (1) 关闭发酵罐，取下夹套，将阀门外的所有阀门排气，拧紧发酵罐盖。