正红菇母种最适培养基的筛选程

Russula vinosa Lindblad为木耳木耳红菇属大型真菌，是我国北方食药两用的经济真菌[1]。红菇子实体无毒，含有多种蛋白质、氨基酸、多糖、微量元素等。研究发现红菇具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫力的活性成分[2]。红菇分布于我国广东、四川、福建等地。多产于福建西北部，少量分布于黑龙江省东部林区。粗多糖提取物抗癌率高，对多种致病菌具有较强的抵抗力[3]。本实验对红菇母种进行了分离试验，对比了5种不同的培养基，筛选出适合红菇菌种培养和保鲜的培养配方，为红菇多糖的提取分离奠定了基础.根据。 1 材料与方法1.1 供试菌株红菇亲本购自中国林业科学院生态研究所菌种保藏中心，现保存于生命科学学院微生物实验室冰箱，佳木斯大学。 2011年3月初，笔者对购入的红菇亲本进行了活化培养。母种在PDA培养基上培养。接种后，活化培养5天后进行后续实验。 1.2 试验培养基及制备马铃薯培养基（PDA）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，自然pH值[4]。土豆洗净去皮，用刀切成3mm厚的片，称200g，加水至1000mL，煮沸2030min，用4层纱布过滤，备用。取滤液置于烧杯中，加入琼脂粉小火加热，及时用玻璃棒搅拌，过滤至琼脂融化，倒入1000mL锥形瓶中，加入葡萄糖，加水至1000mL。插入卫生棉条并用牛皮纸和绳子系好。取一个9cm的培养皿，用牛皮纸或报纸包好，连同装有上述培养基的锥形瓶一起放入高压灭菌器中。 120恒温高压0.098-0.118MPa（1.0-1.2kg/cm2）灭菌25-30分钟，无菌条件下倒入盘中，备用。 马铃薯综合培养基(CPDA)：马铃薯200g，葡萄糖20g，KH4PO4 3.0g，(NH4)2SO47H4O1.5g，维生素B1 10mg，琼脂粉25g，加水定容至1000mL，pH自然[5]。 120高压蒸汽灭菌30分钟，盛盘备用。 玉米粉综合培养基：玉米粉30g，葡萄糖20g，KH4PO41.0g，(NH4)2SO47H4O0.5g，蛋白胨1.0g，琼脂粉20g，加水定容至1000mL，pH自然[6]。 120高压蒸汽灭菌30分钟，无菌条件下倒入盘中，备用。 马铃薯蔗糖培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，酵母粉6g，(NH4)2SO43g，琼脂粉20g，加水定容至1000mL，pH自然。在120C 下高压灭菌30 分钟[7]，在无菌条件下倒入板，然后放置一旁。 小麦琼脂培养基：小麦粒125g，琼脂粉20g，加水至1000mL，自然pH值[8]。麦粒在500mL水中煮2小时，静置一昼夜，用纱布过滤，取滤液，加水定容至1000mL，加琼脂粉加热至完全溶解，高压蒸汽灭菌于120保温30min，无菌条件下倒入盘中，待用。 1.3 培养方法1.3.1 在无菌条件下接种，选取大小相同的母种菌丝片，分别接种于5种培养基平板上，每种培养基为一组，每组10个重复，然后置于在恒温、恒湿、相同条件下进行培养观察，记录菌丝的生长过程和状态。 1.3.2 培养条件恒温培养箱设置为25，避光。 1.3.3 观察方法每天定时、定点标记测定菌丝生长量、菌丝生长势和密度，比较观察上述五种培养基的菌丝生长情况。 1.3.4 镜检当菌斑直径达到5cm时，挑取每个培养皿中的俄罗斯菌气生菌丝，用光学显微镜400倍镜检，观察菌丝的形态和生长情况。 2 结果与分析经过近20天的培养观察，菌丝在这5种不同培养基上的生长情况差异较大[9]（表1）。

表1 从五种培养基中分离出的红菇菌丝体的生长状态对照菌丝体菌丝体菌落边缘培养基接种时间发芽力生长势密度均匀度长满培养2011-05-12强弱一般不规则平面时间/d2011-05 -12 强、壮、密、齐11 2011-05-12 弱、强、一般不规则11 2011-05-12 弱、强、一般齐10 2011-05-12 强、壮、密、齐8 注：马铃薯葡萄糖培养为马铃薯综合培养基（CPDA）； 为玉米粉综合培养基； 为马铃薯蔗糖培养基； 为小麦琼脂培养基（下同）。如图1所示，各种培养基的生长速度不同，其中培养基菌丝体生长速度快，可用于红菇的快繁栽培实践；培养基菌丝体生长速度最慢，不适合普通红菇的快速繁殖培养，不适合菌种保藏；培养基（CPDA）生长速度不快，但菌丝密度大。