防止菌种退化的方法


环境因素,尤其是营养物质,会影响真菌异核体的比例和异核体的分解。此外,不利的环境因素会导致有害物质的积累,使细菌中毒。因此,为防止异核体的分解和同核体的形成及有害物质的产生,必须选择合适的贮藏和培养条件。 1、适宜的储存条件:恒温、低温(2-4)储存,(每六个月激活一次,储存时间尽量缩短至不超过一年); 在保存液中加入0.5%的琼脂(防止培养基中水分大量分布,延长保存时间); 用无菌胶塞代替棉塞(可防止细菌污染和减少与试管外空气的接触,避免斜面干燥,减少营养物质的消耗)。 贮存期满,应及时转移至试管内,或采用其他方法继续贮存,否则细菌极易严重降解,造成严重损失。 2、适宜的培养条件液体培养的最佳培养基:较好的碳源有麦芽糖、葡萄糖、玉米糁、红糖、甘油、蔗糖等,浓度范围为2%5%;较好的氮源有蛋白胨、大豆粉、硝酸铵、蚕蛹、奶粉、酵母膏,浓度范围为0.11%0.15%;较好的无机盐有KH2PO4、MgSO47H2O、KH2PO4、ZnCl2,浓度范围为0.05%0.1%,加入VB1和2、4-D及橄榄油可促进菌丝生长;最适培养温度为22-28,最适pH为5.0-7.0,转速为120-150r/min,接种量为5%10%。 3、最好的固体培养基:较好的碳源包括小麦、大米、小米、高粱米混合物;合适的氮源包括蛋白胨[16]、大豆粉; VB1、2、4-D、K+、Mg2+、Ca2+及植物激素能促进子实体的生长,可作为生长因子; 300-700lx散射光;菌丝培养:温度15-18,湿度65%-70%;子实体培养温度17-25,不超过25,空气湿度80%90%,最适pH范围57。 4、减少传代次数,防止基因突变菌种培养次数越多转移,变化越大。蛹虫草菌种传代、短期保存、菌种繁殖和制种一般不超过3代。如果需要对蛹虫草菌种进行长期保存,可以采用超低温恒温(0-4)、干燥、缺氧等方法,使菌种细胞代谢明显降低等。尽可能缩短传代次数,保证菌株质量。 5、及时净化,必要时对菌种进行复壮。如已有退化菌株,应及时分离纯化,必要时对菌株进行复壮。由于外部形态和生理生化特性,退化菌株与正常菌株存在明显差异。因此,正常菌株可根据外观及时分离。

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