羊肚菌菌种生产中平皿的使用

传统母种的生产是以试管（斜坡）为基础的，所以母种又叫试管种。

在食用菌生产中，试管用于亲本的生产，主要是因为管口小，不易污染，储存和观察也比较方便。根据菌种保存、活化和生产的目的，常使用15150mm、18180mm、20200mm等不同规格的试管。例如，在羊肚菌母种的生产操作中，通常宜采用18180mm规格的试管，一根试管可进行6-8瓶原种的转移。小试管接种量不够，大试管操作不便。

在实际生产和科研中，培养皿也用于培养母种。优点是培养皿容积较大，是试管生产能力的数倍；且开合方便，便于大规模生产。但缺点是操作困难，难以掌握；在科学研究中，平板培养在菌种分离、菌丝形态观察、菌种鉴定、活力检测等方面也具有明显的优势。下面详细介绍平板在山核桃菌种生产中的用途：

板材种类及选用

培养皿又称培养皿、培养皿，分为玻璃制品或塑料制品。玻璃制品可以反复清洗和消毒，而塑料制品通常是无菌一次性产品。平板由上下两部分组成，称为一组。在研究和生产中，通常使用直径为9厘米的培养皿为宜，也可使用直径为12厘米的培养皿，但不要超过15厘米。大型培养皿的单手打开和关闭更加复杂。

塑料培养皿通常是经过环氧乙烷或伽马射线灭菌的无菌产品。它们储存在密封的塑料袋中供一次性使用，不能消毒以供重复使用。相应的玻璃板在使用前可反复清洗、干燥、灭菌。

玻璃器皿的灭菌

玻璃盘的灭菌可以通过高压灭菌或干热来完成。

高压蒸汽灭菌的灭菌方法与常规试管斜面或培养基的灭菌方法相同。用牛皮纸或双层旧报纸或板材杀菌专用不锈钢铁桶，将洗净晾干的板材按套包好。捆扎好，放入高压蒸汽灭菌器中，121灭菌30分钟，再用50烘干机烘干24小时后使用。使用前，所有盘子用牛皮纸或旧报纸紧紧包扎好，不得与外界直接接触，必须彻底晾干。

干热灭菌是实验中常用的玻璃制品灭菌方法。具体操作是将洗净晾干的版材，成套放入消毒过的铁桶中，或用牛皮纸捆扎（报纸不行，报纸不耐高温），放入干热消毒柜中，165消毒C 4小时；冷却后使用。

固体培养基的制备

平板培养所用培养基为固体培养基，需单独配制。常用的培养基是PDA（马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基）培养基。培养基配制好后，分装200mL，置于250mL锥形瓶中。用封口膜密封后，经高压蒸汽灭菌，冷却后使用或贮存备用。

版材制作

首先，将已灭菌的盘子或一次性盘子（不开封）、酒精灯、打火机等操作工具放在超净工作台上，打开紫外线灯，杀灭20-30分钟；关闭紫外线灯，打开风扇，吹风10-15min；打开白灯，开始后续的倒板操作。

在超净工作台杀灭的同时，将前段配制好的固体培养基放在微波炉或电炉上完全溶解，待温度降至50~60（手可耐受的最高温度） ），开始下一步重要操作：倒板（以下操作均在超净工作台内完成）：用75%酒精棉球擦拭双手及工作台面杀灭；打开酒精灯；解开捆绑好的平板放在一边，开机冷却至50~60培养液；左手单手托住盘子开合盖子（小指和无名指弯曲支撑底盖，中指固定，拇指和食指张开打开和关闭）合上上盖，上盖打开方向在酒精灯火焰位置），右手拿着装有培养基的三角瓶，将培养基倒入板中；盛盘后，盖上盖子，放在桌上晾凉备用。每板倒入约15mL，以200mL固体培养基做成13-14板为宜。将倒入好的培养基板固定完全平整，放在实验台上待冷却凝固后使用。

接种

彻底冷却的板开始接种操作。接种也在酒精灯的火焰周围无菌进行。首先，左手拿激活菌株的喷嘴，用酒精灯的火焰轻轻过热2至3秒即可杀死；在火焰上燃烧消毒后，右手小指、无名指、中指配合打开左手试管的试管塞，试管口继续在火焰上燃烧2至3秒，用靠近火焰的接种针钩取出菌块。将应变块放在接种针上，盖上试管塞，放在工作台上；左手空出拿起冷却好的平皿，按照之前倒培养基的动作打开盖子，将菌种放在平皿中间，盖上盖子；接种针继续在火焰上灼烧灭菌，接种完成。接种后的平板需要用封膜密封固定，最好是具有透气性的封膜。封口后倒置在恒温培养箱中培养。

平板播种作业

羊肚菌生长速度快，在23的恒温条件下，一般直径9cm的盘子3-4天即可长成，5-7天即可使用。健壮的菌丝在平板上生长均匀，气生菌丝量适中且均匀，颜色为白色至黄白色，菌核白色而小（长期培养，菌核会增多变黄）。

平板内原种的接种也是在超净工作台中完成的，通常使用双面双面超净工作台。超净工作台灭菌后，两人（或四人）相对而坐，一人负责从平板中挖出菌种，并将菌种放入原种瓶中。具体动作过程与前面的培养基倒出和接种过程类似；另一个人负责打开和关闭原来的瓶盖。两人齐心协力完成了作品。