羊肚菌母种分离—孢子分离法

孢子是食用菌的基本繁殖单位。孢子分离法是利用成熟子实体产生的有性孢子，如羊肚菌的子囊孢子，能自动从子囊果中排出。在无菌条件下，食用菌的孢子在适宜的培养基上可萌发菌丝体，通过栽培试验筛选、比较，获得性状优良的纯菌种，可用于栽培。

所谓有性孢子是指细胞经过核配子和减数分裂产生的孢子，即子囊孢子。有性孢子含有父母双方的遗传物质，可从父母双方遗传。孢子具有生命力强、数量多、变异率高、范围广等特点，因此孢子分离法有更多的机会选择优良菌株。但孢子分离过程繁琐，工作量大，所需时间长。必须通过出菇试验才能投入生产。

羊肚菌菌株的孢子分离方法包括多孢子分离法和单孢子分离法。

多孢子分离法是将许多孢子接种在同一斜面培养基上，使之萌发，自由交配，得到纯菌种。该方法操作简单，广泛应用于食用菌制种。常用的方法是裸奔法。在无菌条件下，用接种环在烧瓶底部蘸取少量孢子，从下往上轻轻划线倾斜培养基，避免划伤培养基表面。裸奔接种完成后，烧灼试管口，插入棉塞，在适宜温度下培养羊肚菌。待孢子菌丝萌发后，选出发育良好、生长快的菌落，移至新的试管斜坡上继续培养，即可得到纯菌，经出菇试验后，可作为母本物种扩展和繁殖。

单孢子分离法是在收集大量孢子的基础上，经稀释后，使孢子相互分离，每个孢子分别萌发菌丝，从而获得纯菌种。单孢子分离法不直接应用于生产，主要作为研究食用菌生物学特性和遗传育种的重要技术手段。

标本采集：一定要采集有大量子囊孢子的成熟子实体。野生羊肚菌的子实体容易成熟，一般较大的都能顺利获得孢子。当培养的子实体在采收的标准大小状态下没有成熟的孢子时，必须等它继续生长，直到子实体表面出现少量白色粉末。当子实体明显老化或倾斜时，有成熟的子囊和子囊孢子。

孢子喷射法：采集成熟的野生或栽培羊肚菌子实体，剪去菌柄基部，用吸水纸包好，立即置于冰袋培养箱中保存，带回实验室。孢子采集可采用三角瓶钩悬法。收集器主要由一个三角瓶、一个金属挂钩（用来挂蘑菇）和一个卫生棉条组成。三角瓶底部放置固体母种培养基或75%酒精棉球用于蘑菇的生长。表面消毒，用无菌水冲洗3次，用无菌纱布擦干表面。在无菌条件下，取一个火焰消毒过的金属钩，将子囊菌柄一端钩住，另一端钩在瓶口上，并在瓶口处加一个棉塞。之后，将孢子收集器放置在合适的温度下。羊肚菌孢子喷出的温度为20-25C。风能促进孢子的排出。 1-2天后，当看到瓶底有一层孢子时，就可以在无菌条件下，去掉种菇和金属挂钩。如果三角瓶中有固体培养基，可以直接在合适的温度下培养。当孢子在培养基表面萌发形成小菌落时，挑取无污染、生长良好的菌落，与培养基一起移至倾斜试管的培养基中。继续培养。如果烧瓶中没有培养基，可直接收集孢子进行斜面培养。如需长期保存，可将装有子囊孢子的三角瓶放入冰箱冷藏。 （综合自百度百科，《羊肚菌生物学基础、菌种分离制作与高产栽培术》何新生；《羊肚菌栽培新技术》贾干一）