食用菌制种过程中干热无菌区接种法技术操作要领

干热无菌区接种法在食用菌制种过程中的技术操作要点：

(1) 材料和用具

蜂窝煤炉一个、工作台（与炉子同高）、椅子、空周转箱、支架、接种针、铲子、镊子、专用接种器、刀片、绳子、保护管（直径20cm的铁皮制成，原装种子瓶等效外径），0.1%水银升棉球，75%酒精棉球。

（二）操作要点

无菌接种室煤炉着火后，微开风门，形成干热气流，即干热无菌区。

亲种分离：将4-5支灭菌琼脂斜试管和谷物试管用绳子绑成一组，将试管口放在支架上，面向干热区。用右手食指取出试管棉条（不可丢弃），在无菌区用酒精棉球对试管棉条表面进行消毒，然后将消毒过的刀递到拇指和右手食指用左手托住，将左手用氯化汞消毒过的食用菌子实体分开，放在右手无名指和无名指之间，然后再用左手将子实体消毒一遍，再放回左手。取柄中央0.5cm见方的组织，用无菌接种针挑起，穿过干热无菌区伸入试管培养基面，用棉塞塞住。按照同样的方法依次完成一组，然后进行第二组和第三组分别接种即可。

转移母种和原种的制备。将已灭菌的试管母种放在氯化汞棉球外壁上，将支架上的喷嘴放入干热灭菌区，取出棉塞。然后用灭菌的接种铲在试管中挑起一小块母种，通过干热灭菌区，插入另一只灭菌母种的培养基面，达到转移母种的目的到管子。母种转原种方法相同，不再赘述。

栽培种制备支架用于将保护管固定在干热无菌区上方并侧卧，将待接种的灭菌栽培种瓶插入保护管内，瓶口插入干热区，然后无菌专用接种器取原种瓶中的原种，经干热无菌区伸入被接种品种的培养基瓶中，挤出，用棉塞盖好， 以便转移瓶中的品种。按照此方法完成所有品种转移。

（三）注意事项

母种、原种、栽培种、离体子实体必须分别灭菌；

接种室、工具、辅助材料必须进行消毒、灭菌；

整个操作不得离开炉膛干热区进行接种；

炉风门微开，如太热可短时关闭；

各级剩菜容器必须是玻璃器具；

接种室应设置无菌缓冲间和空气对流无菌缓冲窗。