不同碳源对蛹虫草菌丝生长的影响

蛹虫草[Cordyceps militaris (L.ex.Fr) Link] 又名北虫草、蛹虫草、蛹虫草。北虫草是一种名贵的药用保健食品，具有广阔的发展前景，也是我国珍贵的中药材之一。其药用成分和各种功效可与冬虫夏草相媲美。特别是有效成分虫草酸和虫草素的含量明显高于冬虫夏草[2]。天然虫草资源十分稀缺，半人工栽培生产周期长，技术难以掌握。通过液体深层培养法可以获得化学成分与天然虫草相似的菌丝体，还可以获得菌丝体分解和未分解的营养物质和代谢产物，可以大大缩短生产周期。为此，笔者采用液体深层培养和固体平板培养的方法，系统研究了北虫草菌丝体的生长特性，现将其碳源对北虫草菌丝体生长影响的试验报告如下。 1 材料与方法1.1 供试菌株蛹虫草斜体菌株由辽东大学实验中心微生物与遗传实验室提供。 1.2 培养基种子活化平板培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2g，盐酸硫胺素10mg，琼脂20g，水1000mL，自然pH。 液体发酵基础培养基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾2g，盐酸硫胺素15mg，水1000mL，pH自然。 固体平板基础培养基：在液体培养基基础上加琼脂20g。 1.3 试验方法1.3.1 菌种活化将固体菌种斜面接种于种子活化平板培养基上，于20-22恒温培养箱中培养一周。菌丝饱满后，颜色会发生变化，以备后用。 1.3.2 不同碳源对蛹虫草菌丝体生长的影响用葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉代替基础培养基中的葡萄糖制备培养基。液体培养基分装于250mL锥形瓶中，每瓶100mL，每个处理重复5次，所有培养基常规灭菌。在无菌条件下，用打孔器取活化的菌种连接到液体培养基中，20-22，130r/min培养，振荡培养一周，然后过滤发酵液，用蒸馏水多次，60烘烤干称。 1.3.3 不同碳源对蛹虫草菌丝体生长速度和菌落形态的影响同1.3.2方法制备固体平板培养基，接种，置于20-22恒温培养箱中培养C 变色前一星期。计算菌丝生长速率并观察菌落形态。 2 结果分析2.1 不同碳源对蛹虫草菌丝体干重的影响试验结果表明，不同碳源对蛹虫草菌丝体生长有不同的影响。由表1可以看出，以可溶性淀粉为碳源培养蛹虫草菌丝时，菌丝产量最高，干重最大，其次是蔗糖，与可溶性淀粉差异显着；以麦芽糖为碳源时菌丝产量最小；除乳糖和麦芽糖处理间差异不显着外，其余处理间差异极显着。 Table 1 The effect of different carbon sources on the dry weight of Cordyceps militaris mycelium dry weight/(g100 mL-1) The average difference was significant treatment Value 0.05 0.01 Soluble starch 0.1918 0.2126 0.2242 0.2032 0.2137 0.2091 aA sucrose 0.1777 0.2114 0.1844 0.1932 0.1789 0.1891 BB葡萄糖0.1470 0.1601 0.1700 0.1532 0.1632 0.1585 CC乳糖0.12650.1364 0.1416 0.1416 0.1409 0.1409 0.1409 0.1366 DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD麦芽糖0.12690.1110 0.144440 0.14-139.139.139.139.14 d11 3.14 d11,12.14 d11长速从表2可以看出，蛹虫草菌丝以蔗糖为碳源生长最快，为4.3 mm/d，其次是麦芽糖。增长最慢的碳源是乳糖，每天仅增长3.5 毫米。除麦芽糖与可溶性淀粉、葡萄糖和乳糖在各处理间差异不显着外，其余各处理差异极显着。表2 不同碳源对菌丝生长速度的影响菌丝生长速度/(mmd-1) 平均处理差异显着 值0.05 0.01 蔗糖4.1 4.1 4.5 4.3 4.5 4.3 aA 麦芽糖3.8 4.1 4.0 4.2 3.9 4.0 bB 可溶性淀粉3.7 4.1 4.0 3.8 3.9 3.9 bB 葡萄糖3.7 3.4 3.5 3.7 3.7 3.6 cC 乳糖3.5 3.4 3.5 3.6 3.5 3.5 cC2.3 不同碳源培养蛹虫草菌落形状碳源对菌落颜色无显着影响，菌落均为明显黄色。

以乳糖和可溶性淀粉为碳源的菌丝体需氧性最强，蔗糖和麦芽糖次之，葡萄糖最弱。以可溶性淀粉为碳源时，菌丝最密，麦芽糖最稀疏。葡萄糖的菌落边缘最干净，其次是可溶性淀粉，乳糖最差。表3 不同碳源培养蛹虫草的菌落形态菌落颜色菌丝体气生菌丝体密度边缘均匀度麦芽糖黄++ * ## 可溶性淀粉黄++++ **** ### 蔗糖黄+++ **** ####乳糖黄++++ ** #葡萄糖黄+** ####注：菌丝气生性分为四个等级，从弱到强，分别用+、++、+++、++++方法；菌丝密度从稀疏到密集分别用*、**、***、****表示；菌落边缘均匀性由弱到强用#、##、###、####表示。 3 结论试验结果表明，以可溶性淀粉为碳源在液体培养中培养蛹虫草菌丝体可以获得最大量的菌丝体。在以蔗糖为碳源的培养基上，菌丝生长最快，气生菌丝数量中等，密度适中，边缘整齐。在蛹虫草菌丝体液体发酵的相关配方研究实验中，试验结果不尽相同。原因可能与所用菌种不同、培养时的温度、培养时间、振荡频率等培养条件有关。菌丝生长与菌丝营养成分之间的关系有待进一步研究和检验。