规模猪场主要疫病抗体水平监测及免疫效果分析

随着畜禽养殖业的规模化、集约化和商品化，畜禽的频繁迁徙和引进，一些病害的发生和发展也越来越复杂。有的病反复发作，反复发作；一些传统疾病不典型，临床症状越来越复杂；新型病毒性传染病日益增多；一些传染病的免疫衰竭时有发生，引起了兽医工作者的高度关注。猪瘟是严重危害养猪业的最古老的疾病之一。近年来，非典型猪瘟逐渐增多。猪伪狂犬病（PR）自1902年在匈牙利首次发现以来，已在世界50多个国家存在，我国20多个省市流行，近期呈蔓延趋势。猪蓝耳病，也称为猪繁殖与呼吸综合征（PRRS），可以感染所有年龄段的猪。自1987年在美国首次发现以来，加拿大、德国、荷兰、英国、法国、日本等国相继报道了该病的流行。我国除台湾外，1996年就有报道，但短短几年内，许多省份都不同程度地报告了该病的存在。近期，许多大型养猪场发生母猪流产、死产、仔猪体弱、胎干尸等情况，大部分都是由这种病原体引起的。为摸清规模化猪场猪瘟抗体水平和免疫状况、猪伪狂犬病、猪蓝耳病阳性率及分布情况，重点开展相应的免疫预防工作，对911份样本进行了检测。杭州24家规模化养猪场。猪瘟、猪伪狂犬病和猪蓝耳病血清抗体报告如下。 1 材料与方法随机抽取杭州市24 个规模化养猪场（未接种猪伪狂犬病和猪蓝耳病疫苗），其中母猪血清621 份，育肥猪207 份，种猪（此处特指作为种公猪，下同）83份，分离血清，21冰箱保存备用。猪瘟间接血凝抗原阳性、阴性和阳性血清购自中国农业科学院兰州兽医研究所，试剂批号：2001019。猪伪狂犬病和猪蓝耳病ELISA诊断试剂盒购自美国IDEXX公司，试剂批号为06685-330FT和09265-089HT。 96孔血凝板购自浙江华东医药公司。血凝试验阳性检测猪瘟血清抗体水平。具体操作步骤如下： 凝血板每孔加入稀释液50ul，每行第一个孔加入待测血清50ul，将待测血清稀释至血清浓度为1： 512，并丢弃最后的50ul。每孔加入25ul抗原诊断液，25湿盒孵育1.5-3h，判断结果。判定标准：血清能凝集50%红细胞的最大稀释倍数即为血清抗体滴度，猪瘟血清抗体滴度1:16为合格为了免疫力。猪伪狂犬病和猪PRRS抗体检测参照美国IDEXX公司ELISA诊断试剂盒说明书进行。待测血清按1:20（用于检测猪伪狂犬病抗体）和1:40（用于检测猪PRRS抗体）稀释。取待测稀释血清100ul加入包被好的96孔聚苯乙烯诊断试剂盒中，置于25湿盒中30min，取出，用洗涤液充分洗涤3-5次， 抖掉残留的液体。向孔中加入100ul酶标抗体，2.5湿盒反应30min，洗净。然后每孔加入100ul TMB底物溶液，置于25湿箱中；作用15分钟后，加入100ul终止液，立即置于BIO-RAD550酶标仪上650nm处测定。根据所附计算公式判断血清抗体是否阳性。 2 结果2.1 CSF 免疫状况母猪、育肥猪和种猪的CSF 血清抗体滴度见表1。在检测的608 头母猪血清中，3 头（0.49%）血清样本检测不到CSF 抗体，45 头样本CSF血清抗体低于1:8，占检测总数的7.4%；有563份样本猪瘟血清抗体1:16，占92.6%；供试的157头育肥猪血清中，大于或等于1:16的血清数为98头，免疫合格率为62.4%。 78头种猪血清中，61头血清抗体水平高于或等于1:16，占总数的不到0.2%。猪瘟免疫合格率顺序为母猪、种猪、育肥猪。猪血清中猪瘟抗体的滴度分布及免疫效应[J]. 在全部843份猪血清中，5份对CSF的血清抗体效价为0，占总数的0.6%，722份CSF血清抗体水平高于或等于1:16，免疫合格率为85.64%。调查的24个规模化猪场猪瘟免疫效果差异较大，免疫合格率在57.14%100%之间。但大部分猪场免疫水平较高，14家猪场猪瘟免疫合格率大于等于90%。如果猪场猪免疫合格率大于80%，则认为猪场免疫合格，猪瘟免疫合格的猪场不多，占83.33%。可见规模化猪场对猪瘟的免疫效果还是比较好的，具体结果见表1和表2。 表1母猪、育肥猪和种猪血清抗体滴度及其分布百分比/% 抗体血清拷贝---------------------- ---------------------- ----------母猪育肥猪种猪总数母猪育肥猪种猪平均1:03250.51.3nbsp;0　　 0.6 1:2　　 3　　 2　　　　1　　 6　　 0.5　　1.3　　 1.3 0.7 1:4　　 5　　 19　　 8　　 32　　 0.8　　12.1　　10.3 3.8 1:8　　 34　　 36　　 8　　 78　　 5.6　　22.9　　10.3 9.3 1:16　　58　　 38　　 15　　 111　　9.5　　24.2　　19.2 13 1:32　　86　　 24　　 8　　 118　　14.1 15.3　　10.3 14 ≥1:64 419　　36　　 38　　 493　　68.9 22,9　　48.7 58.5 合计　　608　　157　　 78 表2 24个规模猪场猪瘟免疫状况 免疫合格率／％　　猪场数　　占百分比／％ -----------------------------------------　　 90-100　　　　　　14　　　　 58.3 80-90　　　　　　 6　　　　 25 70-80　　　　　　 1　　　　 4.2 60-70　　　　　　 1　　　　 4.2 ≤60　　　　　　 2　　　　 8.3     2.2 猪伪狂犬病抗体阳性检出率 　　在所检测的24个规模场中，共有20个场检测出伪狂犬病抗体，占总数的83.33％。911份血清中，365份血清呈伪狂犬病抗体阳性，占整个检测样品的40.07％，其中母猪、肥育猪、种猪伪狂犬病抗体阳性率分别为50.24％、29％、24％。具体结果见表3。     表3 PRV及PRRSV血清抗体阳性检出率 猪种　　　　　　 PRV抗体　　　　　　　　 PRRSV抗体 　　　　 -----------------------　　-------------------- 　　　　　　 阳性数　　阳性率／％　　阳性数　　阳性率／％ 母猪　　　　 312　　 50.24　　　　 220　　 35.4 肥育猪　　 29　　　　14.01　　　　 100　　 48.3 种猪　　　　 24　　　　28.9　　　　 42　　　　50.6 合计　　　　 365　　 40.07　　　　 362　　 39.74     2.3 猪蓝耳病抗体阳性检出率 　　24个规模场中，共有17个场检测出蓝耳病抗体，场阳性率达70.33％。在911份血清中，猪蓝耳病抗体阳性份数为362份，占39.74％，与伪狂犬病相差无几。其中母猪、肥育猪、种猪阳性率分别为35.4％、48.3％、50.6％。具体见表3。     3 讨论 　　本研究表明，从整体上看猪瘟的免疫状况较好，以猪瘟抗体间接血凝价在1：16以上时能抵抗强毒感染为参考，大多数猪场和猪群能达到这个水平。但也有部分猪场的少数猪，猪瘟抗体滴度低下，不足以抵抗强毒侵袭而发病或成为隐性带毒者，威胁易感猪群。这可能与猪瘟疫苗免疫程序不合理和免疫质量不好有关。 　　调查中发现，猪伪狂犬病抗体阳性场达20个，占整个调查场数的83.33％。其中母猪抗体阳性率非常高，为50.24％，种猪、肥育猪分别为14.01％和28.9％，情况非常严峻。近期，很多猪场均发生以母猪流产、产死胎、木乃伊胎、弱仔及仔猪出生后几日内急性死亡病例，经诊断大多为此病引起。由于伪狂犬病可感染各种年龄阶段猪，又可致猪隐性带毒；近来，其毒力和侵袭力有呈动态的持续渐增趋势，并且，病毒的传染链中有鼠类参与，给净化和净化保持带来了相当的难度。实验室和田间试验都已证明PR野毒间、野毒与活苗毒株有重组现象。有些场采用灭活苗和基因缺失苗免疫接种，效果欠佳。但不论怎样，小群内清除感染，使用基因工程致弱活毒苗及相容的血清学试验来区分疫苗抗体和野毒感染诱导产生的抗体是必要的。总的来说，对猪伪狂犬病阳性猪场和受威胁猪场建议使用疫苗，但应同时加强血清抗体监测，监测疾病流行情况和发病区域。非流行场应以清除感染猪只为主，加强净化。 　　前几年我省较为少见的猪蓝耳病，近来发病率渐增。此次调查显示，24个规模养殖场，猪蓝耳病抗体阳性场达17个。在所调查的911头猪血清样品中，母猪蓝耳病抗体阳性率为35.4％，肥育猪为48.3％，种猪为50.6％。由于本病主要引起猪繁殖障碍，症状易与猪伪狂犬病、猪瘟混淆，病毒易于扁桃体、上呼吸道和肺泡内巨噬细胞和树突状细胞内寄生复制，降低猪体免疫力。进而继发或伴发其他病原微生物如衣原体、猪链球菌、副嗜血杆菌、猪放线杆菌等感染，加剧病情，导致临床症状变化多样、死亡率升高，给本病的确诊带来很大困难。PRBS病毒在扁桃体和肺内可存在3周到1年的时间，康复猪通过呼吸道、唾液腺、粪便、尿及精液散毒。在以后的3-6个月或更长的时间内可能成为其他猪感染的来源，造成该病的持续存在。因此，加强对该病的诊断试剂和防制措施的研究乃当务之急。目前，对该病的防治由于无特效药，仍以预防为主。同时，PRRSV是抗体依赖性感染病毒，因此，在生产中盲目使用疫苗特别是弱毒疫苗是不可取的。应加强猪群的血清学监测，特别是引种过程中的检测，坚持猪群全进全出制，严格隔离、检疫、消毒工作，逐步淘汰阳性猪，进而达到净化目的。