关于猪蓝耳病的六大疑问,绝对涨知识!


于秀玲:博士中国农业大学兽医病理学博士。曾任军事医学科学院实验动物中心副研究员,中国动物疫病预防控制中心病理室主任。长期从事实验动物病理检测研究。

问题一:为什么很多猪场会出现PRRS免疫或者不免疫,而且病情会很严重,造成很大的损失?

答:我觉得不仅PRRS,我国的猪病都有一个共同的问题,就是诊断的问题。许多猪场在临床现场诊断该病,或者在实验室检测到PRRS病毒后立即诊断为PRRS病毒。这里需要强调的是:PRRS的检测PRRS的存在。

疾病是病原体引起临床影响的过程,病原体可以潜伏在体内,处于持续感染状态,并不一定会引起临床问题。另一方面,目前绝大部分的蓝耳病都是用减毒活疫苗进行免疫,在一定时间内可以检测出疫苗病毒。因此,检测到的病毒如果不进行基因测序等鉴定检测,很可能会引发严重的疾病。临床误诊。

问题2:临床上很多猪群都检测到PRRS病毒,那么如何判断猪场是否存在PRRS病毒引起的疫情呢?

答:第一,在近期没有进行PRRS免疫的情况下,建议使用双血清的评价方法。即猪场一直处于持续监测状态,当感觉到临床不稳定时,应将血液检测与原监测的检测结果进行比对。如果血清PRRSV抗体值在不稳定的时候突然升高,一下子有很大的变化,可以认为是PRRSV的影响。

二是在猪场疫情早期,及时剖检和送检样本送实验室,对早期有代表性的病猪进行检测诊断。

如果在疫情早期没有采集样本,或者经过一段时间的各种方法治疗后进行检测,可能的诊断是多种病原体混合感染,而不是本次疫情的病原体。现实中,在大多数情况下,这群患者等到检测结果出来再采取措施控制时,已经来不及了。其实在发病初期就可以取样检测,根据临床判断采取控制措施。这样,当诊断结果出来的时候,即使之前的判断是错误的,也可以确认病因,对今后的疫情防控具有指导意义。

问题三:PRRS检测应采集哪些靶组织器官样本?

答:对于蓝耳病,血液样本是好的样本。此外,对发病过程中有临床代表性的猪进行尸检,选择病毒检出率高的靶器官组织(PRRS病毒除血液、扁桃体、肺为最主要的靶器官外,肺门和下颌淋巴结也可以检测)。

作为一种PRRS 病毒,其最重要的靶组织是扁桃体和肺。血液作为最容易采集的样本,在PRRS的检测中具有重要意义。血液中病毒的检测时间比较早。一般感染后3天左右即可从血液中检测出来,持续时间也很长,可达2-3个月。因此,血液是活体检测的最佳选择。扁桃体和肺是尸检动物最重要的靶器官。

问题4:如何鉴别PRRS。保育猪的蓝色耳朵是否一定意味着蓝耳病?实验室检测如何区分高蓝株和经典株?

答:首先纠正一下。蓝耳不一定就是蓝耳病。当周围循环受损时,猪的耳朵会变蓝。

PRRS的典型症状是结膜炎,起初可能是浆液性的,后来可能发展成粘液。 20-40%的高致病性PRRS猪有神经症状,因为PRRS病毒后期会进入脑组织,引起一些神经症状,如运动障碍、抽搐、后肢麻痹等。扁桃体出血、溃疡、肺组织实变。脓毒症可见脾脏肿大、充血、梗死,但这种肿大不同于我们在猪瘟、非洲猪瘟和一些细菌性疾病中看到的脾脏肿大,除非后续继发细菌感染,否则损害单一PRRS病毒引起的脾脏极度肿大不易见。

临床上,近年来在PRRSV的鉴定和检测方面做了大量工作。我们用来检测PRRS的PCR方法可能多种多样,有的可能直接检测高致病性PRRS,有的可能检测经典PRRS。事实上,在所有的病原体检测方法中,并没有所谓经典的PRRS病毒,只有PRRS病毒通用的RT-PCR。因为PRRS病毒的一般检测方法是针对PRRS病毒最保守的片段设计的引物,不同的引物具有不同的灵敏度。作为PRRS病毒的检测方法,使用最保守的片段引物是最灵敏的。我们一般检查用的RT-PCR就是这样一种方法。

例如,使用常规检测RT-PCR方法,十个样品中有八个被检测为阳性,而使用RT-PCR方法(引物)检测突变株,十个样品中有六个被检测为阳性。并不是说漏检的2个弱阳性就是经典菌株,而是因为两种方法的灵敏度不同,所以没有检测到2个弱阳性样本。如果送去测序,可能都是突变株。所以用一般的检测RT-PCR方法只能告诉你PRRS病毒检测呈阳性,而不能确定是哪个毒株。然后用RT-PCR检测突变株的方法,检测有的呈阳性,有的呈阴性,因为后一种方法的灵敏度低于一般的检测方法。原来的强阳性现在是阳性,弱阳性是阳性。负的,而且不能说变成负的部分就是经典毒株。

在某些领域,既有高致病性的,也有典型的PRRS检测病例,这可能是由于检测方法的敏感性不同导致对检测结果的误解。如果一般检查的结果是阳性,还需要再进行一次鉴别检查,告诉你是什么病毒株。

问题5:如何鉴别与PRRS临床症状相似的疾病?

答:对临床症状相似或相同的疾病进行鉴别诊断非常重要。在某些领域,就临床诊断而言,将其他疾病引起的症状归因于PRRS。例如,2012年在伪狂犬病流行株引起的猪伪狂犬病暴发点,受累猪出现了与高致病性蓝耳病相似的肺部实变,但组织切片显示情况却大不相同。病猪肺部组织学上可见坏死灶,这是伪狂犬病的典型病变,因为灶性坏死是伪狂犬病的组织学特征。然而,PRRS 主要在肺泡2 型细胞和巨噬细胞、肺

组织除了间质性肺炎并没有其他变化。之后在肺免疫组化染色中检出的是伪狂犬病毒而没有蓝耳病毒。这些临床表现相似的疾病在病理组织学中是可以清晰的做区分的。

问题六:现在在蓝耳病毒的检测中还需要区别野毒和疫苗毒,那么猪场如何去区分是野毒感染还是疫苗毒,以及如何评价打苗以后的结果?怎么去做检测?

答:实际上蓝耳病毒的抗体检测方法有很多,但是对现在大规模样品检测来说,ELISA是一个相对方便能够在临床上推广应用的方法。ELISA方法有很多商品化试剂盒,在国内用的最多的是两类。一类是N蛋白包被的试剂盒,一类是糖蛋白包被的试剂盒。那么这两类试剂盒的蛋白包被是一个什么关系呢?与病毒免疫原性相关性更好的是膜上的糖蛋白,而病毒感染首先激发的是跟核酸相关的N蛋白。

那么在临床下什么情况下该选什么蛋白包被的试剂盒呢?N蛋白激发抗体产生时间很早,如果是一个没有感染过蓝耳病的地区或场,一定是用N蛋白来做防控预警。还有就是做双份抗体的检测,猪场一旦出现N蛋白抗体在没有免疫的情况下出现一个跳升,一定和蓝耳病毒感染发病相关性很大。

包被不同蛋白试剂盒之间的区别

而作为疫苗的免疫效果检测的,则与糖蛋白相关性大,N蛋白产生的抗体只代表是不是有感染,与中和抗体及攻毒保护结果其实相关性不大。N蛋白抗体出现较早,持续时间相对短,且与免疫保护相关性较小。糖蛋白抗体产生时间晚,且持续时间长,与免疫保护相关性更好,所以通常用它来做免疫后抗体水平监测,监测猪群是否处于保护状态。

PRRSV主要蛋白的作用

注:使用上述不同蛋白作为包被抗原的ELISA试剂盒,在临床上可用于不同免疫和感染背景的猪群。

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