牛伪狂犬病诊断方法有哪些？

实验诊断

(1)病原学检查。

病料收集：收集脑组织(中脑、小脑、脑桥和延髓)、扁桃体、肺、脾和淋巴结，其中脑组织是理想的病毒分离材料，也可收集患部鼻咽洗液和水肿液作为病料。

直接镜检：伪狂犬病病毒具有疱疹病毒的一般形态特征。电镜观察显示，病毒颗粒呈圆形或椭圆形，中心有核，内含双链RNA，外面有衣壳，呈二十面体对称，外面有病毒包膜，包膜表面有纤丝。

分离培养：将病料如脑组织或扁桃体研磨成10%病料悬液，每毫升加入青霉素1000 IU和链霉素1000 g处理，离心取上清液接种；鼻咽洗液或水肿液离心去除大块沉淀物，经青霉素、链霉素处理后可用于接种。该病通过绒毛尿囊膜接种于9 ~ 11日龄鸡胚。4天后，绒毛尿囊膜出现灰色斑驳病变，胚体出现弥漫性出血水肿，因神经系统受侵而死亡。也可将病变材料接种到猪肾细胞、兔肾细胞和鸡胚成纤维细胞中，发生细胞病变效应。显微镜下，病理细胞中可见细胞核内的嗜酸性包涵体。

动物接种试验：将病料悬液经抗生素处理后，离心取上清液，给家兔皮下或肌肉接种，每只注射1ml。接种后2-3天，注射后出现局部瘙痒，家兔出现不安，摩擦或咬痒部位，导致局部脱毛、皮肤溃烂、出血，继而四肢瘫痪、衰竭死亡。也可以用小鼠或豚鼠做接种试验。

(2)血清学试验。病毒中和试验、琼脂扩散试验、补体结合试验、免疫荧光抗体技术和酶联免疫吸附试验可用于诊断伪狂犬病，其中病毒中和试验灵敏度高。

辨证：

伪狂犬病常与李氏杆菌病、狂犬病及其他类似疾病相鉴别。

(1)伪狂犬病和李氏杆菌病的鉴定。感染李氏杆菌病的牛一般没有皮肤瘙痒症状。显微镜下，血涂片染色显示多核巨细胞增多。通过显微镜检查，可以发现革兰氏阳性李斯特菌。接种该悬浮液的家兔未发现特殊的瘙痒症状。

(2)伪狂犬病和狂犬病的鉴别。狂犬病动物一般都有被患病动物咬伤的历史，患病动物在兴奋时往往会有攻击性行为。通过皮下接种悬浮液通常不容易感染兔子。脑内接种后，发病后无皮肤瘙痒。