鱼类精液保存技术

精子运动所需的能量来自原生质中的营养物质。因为精子的原生质很少，能量有限，精子排入水中并被激活的寿命很短。精子的能量也被用来调节细胞内外渗透压的平衡。鱼类精液的保存是通过降低精子代谢率来降低能量消耗，从而达到延长精子寿命的目的。

随着鱼类养殖业的快速发展和杂交育种、良种选育、提纯复壮的发展，鱼类精液保存技术的应用越来越广泛。鱼精液可以常温保存，也可以冷藏冷冻。常温和冷藏用于短期精液保存，冷冻或超低温冷冻用于长期精液保存。本文简要介绍了鱼类精液保存技术。

1.在室温下储存

常温下，将鱼类精子保持在等渗环境中，可以减少精子调节渗透压平衡的能量消耗，延长精子寿命。在人工授精过程中，用生理盐水代替淡水可以提高受精率。

第二，冷藏

冷冻保存是利用普通冰箱的冷藏室(0~4)保存鱼类精液。这种方法可以保存精液几天到几十天。如果在精液中加入适当的稀释液，减少冷藏室的问题，保存时间会更长。冷藏过程中，精子新陈代谢较弱，需要消耗氧气，所以在保存过程中要保持一定的空气或氧气。抗生素对于精液的冷冻保存至关重要。常用的抗生素有：青霉素，5000IU/ml精液；硫酸新霉素，1毫克/毫升精液；青霉素1000IU链霉素5000IU/ml精液；金霉素0.6毫克/毫升精液。硫酸新霉素和青霉素链霉素效果较好。该方法简单，成本低，适合在生产中推广应用。

第三，冷冻保存

常温和冷藏用于短期精液保存，冷冻或超低温冷冻可长期保存精液。常用的制冷剂有干冰和液氮。在超低温下，精子代谢停滞，精子处于假死状态，生命以静止的形式保存下来。精子冷冻保存的基本技术路线是：采精添加稀释液和防冻液冷却平衡液氮长期保存解冻复苏活力检测。

1.稀释剂和防冻剂

稀释液的制备是鱼类精液冷冻保存的关键步骤。由于鱼类物种的特殊性，不同的鱼类精液冷冻保存需要不同的稀释液，目前没有统一的标准。通常认为稀释剂的组成在合适的范围内越简单越好。鱼类精液保存所用的稀释液主要包括盐类(如碳酸氢钠、氯化钠、KCl等。)、糖类(如葡萄糖、果糖、蔗糖等。)、脂类(主要是磷脂)、蛋白质(如蛋黄、牛奶、小牛血清等。)和其他添加剂(如维生素、抗生素等。).研究表明，使用葡萄糖和柠檬酸钠组成的稀释液可以使海水鱼获得良好的冷冻效果。淡水鱼稀释液应以氯化钠和氯化钾为主，加入少量氯化钙、氯化镁、碳酸氢钠和葡萄糖。常用的防冻剂有甘油、二甲基亚砜、乙二醇、乙酰胺、丙二醇等。甘油是海水鱼精液冷冻保存的有效防冻剂，二甲基亚砜则广泛用于淡水鱼精液的保存。

2.凝固法

方法目前主要有四种冷冻方法：颗粒冷冻：麦管冷冻；玻璃安瓿冷冻法；塑料离心管冷冻法。目前造粒法由于冷冻量小，操作麻烦，很少使用。玻璃安瓿法虽然体积大，效果好，但瓶口密封麻烦，解冻时安瓿容易爆裂，使用受到限制。而小麦管冷冻和塑料离心管冷冻由于冷冻量大、操作简单、安全，在鱼类精液冷冻保存和精子库建立中应用广泛。

3.冷却平衡

是否需要冷却平衡取决于鱼的种类。对于特定的鱼精子，存在特定的冷却速率。冷却速度过快或过慢都会导致细胞损伤，降低精子存活率。目前常用的下降速率为-10/min。达到一定低温(-76、-150等)后。)，要么直接浸入液氮，要么平衡一段时间后浸入液氮。

解冻并恢复

解冻复苏就是精子升温、溶解、复苏的过程。解冻的关键因素是解冻液和解冻速度。用0.65%~0.7%氯化钠溶液作为淡水鱼冷冻精子的解冻液，海水可直接用作海水鱼冷冻精子。解冻方法有室温自然解冻和快速解冻，常用的方法是在30~40的水浴中快速解冻。一般来说，如果冷却速度较快，相应的再加热速度也要较快。

5.活力检验

解冻后立即在显微镜下检查精子活力：即精子在视野内直线运动的百分比。原地振动或摆动或弱曲线运动的精子没有受精能力。

随着鱼类养殖业的快速发展和杂交育种、良种选育、提纯复壮的发展，鱼类精液保存技术的应用越来越广泛。精液保存的鱼类种类从相对单一的品种扩展到常见的海洋淡水鱼类和一些濒危、珍贵的水生动物，保存方式也从简单的室温保存、冷藏保存逐渐深入到更加复杂的冷冻保存。鱼类的精子保存技术已经越来越完善。建立了鲤科、鲑科、斑马鱼、罗非鱼、裂腹鱼科、鲻鱼等淡水和海水鱼类的超低温保存技术，建立了淡水鲤科和部分经济海水鱼类的冷冻精子库。但仍有许多问题有待解决，如冷冻条件的优化(稀释液配方、降温速率、冷冻保存方法和解冻温度等)。)、冷冻损伤导致的精子死亡或活力降低、防冻液的洗脱。