猪流行性腹泻疫苗的研究进展

【摘要】：猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性肠道传染病，以呕吐、水样泻为特征。目前，该病在我国及周边国家广泛流行。随着科学家对这种疾病认识的不断加深，针对这种疾病的各种疫苗也相继研制出来。本文综述了猪流行性腹泻的各种疫苗，为该病的预防和疫苗的选择提供一定的参考。

关键词：猪流行性腹泻；疫苗

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪的急性肠道传染病[1]。各年龄、各品种的猪均可感染本病，年龄越小，发病越重；年龄越大，病情越轻[2]。该病于1971年在英国首次报道，并很快在欧洲各国流行起来。该病在亚洲的流行较欧洲严重，呈现出哺乳仔猪发病率高、死亡率高的特点。该病于1976年在我国首次报道，到2000年该病已在全国流行。特别是2006年以来，该病在我国免疫猪群中再次流行，给我国养猪业带来了极大的危害。

任何动物疫病的防治，都非常有必要贯彻“营养重于预防、预防重于治疗、预防为主、营养与预防相结合”的方针。除了加强饲养管理外，使用疫苗进行防疫是我们防控PED的主要手段。本文结合国内外研究进展，对PED疫苗的研究进展进行综述。

1、灭活疫苗

1.1 组织灭活疫苗

灭活疫苗作为一种传统的疫苗，在动物疫病的防治中发挥了非常重要的作用。它的主要优点是：安全，没有传播毒物的风险；抗原含量高，能产生持久的免疫力；便于运输和储存。

PED疫苗研制初期，我国主要使用组织灭活疫苗。 1993年，哈尔滨兽医研究所王明[3]将PEDV上海株（S株，经仔猪接种、免疫荧光检查及与CV777比对试验证实为PEDV）接种于3-9日龄健康幼犬.猪典型发病后强制宰杀，取小肠组织及内容物制备氢氧化铝灭活疫苗。后海穴注射疫苗，仔猪主动保护率达85%，被动保护率达97.06%。

1.2 细胞灭活疫苗

由于生产工艺繁琐、成本高、产品质量控制困难、灭活不完全等安全因素，组织灭活疫苗很少大规模应用于临床。细胞灭活疫苗恰好弥补了组织灭活疫苗的缺陷，在临床上得到广泛应用。 1994年，哈尔滨兽医研究所研究员马思奇等[4]采用在病毒培养基中加入适量胰蛋白酶的培养方法，使PEDV CV777适应Vero细胞，制备氢氧化铝灭活疫苗28代毒，后海穴接种，仔猪主动免疫保护率85.19%，被动免疫保护率85%。采用该方法制备细胞灭活疫苗是国内各大疫苗生产企业制备PED细胞灭活疫苗时最常用的方法。

由于PED在临床上常与猪传染性胃肠炎（TGE）混合出现，且两种病毒均为致病机制相似的冠状病毒，因此目前常用的预防猪病毒性腹泻的疫苗在猪群中普遍流行。急性腹泻-猪传染性胃肠炎双灭活疫苗。该疫苗由哈尔滨兽医研究所率先研制成功。其特点是：疫苗毒性高，一次注射可同时免疫两种疾病，省时省力；同时在后海穴注射，增强身体的保护作用。该疫苗的研制成功，对国内控制猪病毒性腹泻起到了至关重要的作用。后来，哈尔滨兽医研究所的李峰等研制出了猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎-猪轮状病毒三联灭活疫苗。该疫苗的田间试验表明，该疫苗的区域保护率超过95%。猪场腹泻发生率从8%-12%下降到2%-3%，证明该疫苗具有良好的应用前景[5]。

2.弱毒疫苗

2.1 注射用弱毒疫苗

灭活疫苗虽然具有安全、稳定、储运方便等优点，但存在单次免疫剂量大、免疫周期短、需要加强免疫、易引起局部反应等缺点，促进了减毒PED的发展疫苗。童友恩等。 [6]利用CV777强毒株适应Vero细胞系，用104-124代细胞适应病毒制备了5批次疫苗，主动免疫保护率为95.92%，用Vero细胞株制备了8批次疫苗。 106-139代疫苗适应病毒，主动保护率为96.2%。 TGEV弱毒组合制备的双弱毒疫苗经现场试验证实具有良好的免疫效果。目前，猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎-轮状病毒三联活疫苗在田间试验中也证明了良好的应用效果[5]。 Kweno等[7]利用分离出的野生毒株（命名为KPEDV-9）使其适应Vero细胞并连续传代93代进行主动免疫、被动免疫和安全性测试，结果证实其可作为Vero细胞的免疫载体。减毒疫苗。日本P-5V毒株虽未见连续传代减毒报道，但自1997年起在日本用于PED防控。

2.2 口服弱毒疫苗

4日龄至13日龄，仔猪对疾病的抵抗力仍取决于母猪初乳和乳汁中抗体的高低。当肠道组织接触到病原体时，IgA 会从肠道迁移到乳腺，在那里IgA 会富集并最终释放到初乳和乳汁中。这种“肠道-乳房”迁移是设计最佳疫苗的重要概念[8]。

用细胞适应株PEDV DR13制备的口服疫苗已被证明比注射疫苗具有更好的免疫效果。同时，三代抗毒实验证明该菌株具有良好的安全性。从2004年开始，韩国批准使用这种口服疫苗来控制国内PEDV的流行。这种疫苗于2011年在菲律宾注册并商业化。然而，疫苗的保护力与疫苗的抗原含量密切相关。有实验证实，对实验猪给予低剂量抗原后，保护率只能达到25%，但当剂量为20倍剂量时，保护率会更低。

　　3. 转基因植物疫苗

　　由于看到粘膜免疫在PED免疫机制上所发挥的重要作用，科学家开始将目光投向PED转基因植物疫苗的研究。2003 年，韩国Bae等[9]将 PEDV 中和表位区域 COE 基因转入到烟草，构建了表达抗原的转基因烟草。利用表达的抗原口服免疫小鼠，试验结果表明能有效地诱导产生保护宿主细胞免受 PEDV 感染的体液和黏膜免疫应答。尽管在烟草中表达的 PEDV 表位有抗原决定簇，但是外源抗原在烟草中表达水平低限制了转基因植物疫苗的发展，为此，2005 年，Kang等[10]在无尼古丁的烟草中表达了合成的 PEDV 中和表位基因，外源抗原的表达量占全部可溶性植物蛋白的 2.1%, 大约是天然基因表达量的五倍，为可食转基因植物疫苗的研究奠定了基础。

　　4. 乳酸杆菌疫苗

　　乳酸杆菌作为微生态制剂中主要的益生菌被广泛应用于食品及饲料生产中。有人将PEDV N基因克隆到乳酸杆菌中，并表达于其表面。实验证实，不论猪或者小鼠饲喂该疫苗后在体内均未检测出针对PEDV的中和抗体。但是却检测出针对N蛋白的IgA和IgG抗体[8]。

　　5. 讨论

　　由于目前PED在欧洲并没引起很严重的经济损失，因此针对PED的疫苗研制主要集中在中国、韩国、日本等亚洲国家。韩国、日本等国家目前都使用从本国田间分离到的毒株适应细胞，然后扩大培养制备弱毒疫苗的方式来生产PED疫苗。而我国目前仍普遍使用CV777毒株，但多篇文章已证实CV777毒株和目前在我国流行的毒株在基因上具有一定差异，这是否是国内免疫猪群仍暴发PED的原因仍待进一步讨论。但针对PED的新型及更有效的疫苗的研制已经迫在眉睫。从目前PED在国内流行的趋势来看，猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联疫苗及猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎-猪轮状病毒三联疫苗的使用是值得推广的控制猪病毒性腹泻的疫苗。

　　目前针对PED的疫苗研制已经取得可喜进展，随着人们对PEDV的了解不断加深，相信科学家会研制出更加有效的疫苗来控制PED的发生。

　　参考文献：

　　[1] Pensaert M B, Debouck P. A new coronavirus-like particle associated with diarrhea in swine[J]. Arch Virol, 1978, 58(3):243-247.

　　[2] 王凤，汤德元，李春燕，等. 猪流行性腹泻病毒基因及其疫苗的研究[J].猪业科学，2010（12）：42-47

　　[3] 王明，马思奇，周金法，等. 猪流行性腹泻灭活疫苗的研究 [J].中国畜禽传染病，1993,5:17-19.

　　[4] 马思奇，王明，周金法，冯力 . 猪流行性腹泻病毒适应 Vero 细胞培养及以传代细胞毒制备氢氧化铝灭活苗免疫效力试验.中国畜禽传染病，1994（2）:15-19.

　　[5] 陈建飞，冯力，时洪艳，等. 猪流行性腹泻疫苗的研究[J]. 猪业科学，2010（12）：50-51

　　[6] 佟有恩，冯力，李伟杰．猪流行性腹泻弱毒株的培育. 中国畜禽传染病，1998，（6）:329-332．

　　[7]  Kweon C H，Kang Y B，Kwon B J，et al．Derivation of Attenuated Porcine Epidemic Diarrhea Virus(PEDV) as Vaccine Candidate[J]．Vaccine，1999，17（20/21）：2546-2553．

　　[8] Daesub Song，Bongkyun Park. Porcine epidemic diarrhoea virus: a comprehensive review of molecular epidemiology, diagnosis, and vaccinesVirus Genes (2012) 44:167–175

　　[9] Bae  J  L，Jang  YS，Yang  MS，et  al．Induction of Antigen-specific Systemic and Mucosal Immune Responses by Feeding Animals Transgenic Plants Expressing the Antigen[J]．Vaccine，2003，21（25/26）：4052-4058．

　　[10] Kang T J，Jang Y S，Yang M S，et al．Expression of the Synthetic Neutralizing Epitope Gene of Porcine Epidemic Diarrhea  Virus in Tobacco Plants without Nicotine[J]．Vaccine，2005，23（17/18）：2294-2297．