动物用疫苗不安全因素和解决方法

不安全因素及解决方案不安全因素外毒素、热原、外源蛋白、内毒素包括革兰氏阴性菌、卵源、血清和环境。蛋源包括疫苗生产用蛋、SPF蛋（被非致病性沙门氏菌、大肠杆菌等污染）、非免疫性蛋（被鱼粉沙门氏菌污染、经常使用抗生素减少输卵管炎、蛋壳钙化、畸形蛋）、用于疫苗生产的禽流感鸡蛋。注射ET疫苗污染后动物的临床反应：头部肿胀、面部肿胀、食物和水被剥夺、局部炎症、休克、死亡；生产性能下降；免疫功能下降，易患疾病，对疫苗的反应下降。细菌内毒素对细胞培养的影响改变了细胞的形态；激活细胞产生信息传递物质，影响其下游生物体；通路反应；抑制维生素活性；影响细胞粘附。 LPS的自发释放：内毒素的主要成分是脂多糖（LPS）；抗菌药物诱导细菌释放内毒素；抗菌药物诱导LPS 释放的动物实验；抗菌药物诱导LPS 释放的临床研究。抗生素的应用导致疫苗中内毒素的释放。庆大霉素、环丙沙星、青霉素、链霉素；家兔大肠杆菌脑膜炎——静脉注射头孢噻肟、氯霉素、庆大霉素，在24小时内脑脊液内毒素增加210倍。临床上，兔子的死亡是大量使用抗生素的结果，因为抗生素杀死了大肠杆菌，大肠杆菌被裂解释放出大量内毒素，从而杀死了兔子。杀。解决方案减少原材料和操作的污染；减少对动物衍生物质的依赖；改进生产工艺（消除内毒素）：使用抗内毒素药物，如内毒素抗体、内毒素结合蛋白（高密度脂蛋白）、多粘菌素B和妥布霉素、脂质A结构类似物（E5531）；抗细胞因子药物如腺苷类药物如氯胺酮等，糖皮质激素如地塞米松等；抗内毒素中药，如青蒿素、黄连解毒汤，氨基酸如甘氨酸、乳果糖、胆盐等。去除内毒素——物理方法超滤、石棉和活性炭吸附、离子交换层析、亲和层析（使用抗内毒素抗体）等动物疫苗质量控制疫苗生产用病毒、生产用细胞（原代细胞、传代细胞） 、疫苗生产过程、灭活剂、抗生素、血清、佐剂。疫苗生产用病毒种子原种：我国自行隔离，从国外进口。创建3 个种子批次。主种子批和工作种子批：主种子批是指在原有种子批基础上的扩大；工作种子批是指从主要种子批建立扩展。三级种子必须按照《中国兽药典》的要求进行检验。疫苗生产用细胞原代细胞要求：一般15代以内，牛血清、胰蛋白酶、培养基等细胞培养材料应符合《中国生物制品主要原材料质控标准》的要求：每批疫苗生产用细胞均应进行外源因子检测、细菌、真菌和支原体检查，均应为阴性；传代细胞要求： 建立细胞库：细胞库体系是指每批产品的起始原料一致；细胞库通常为二级管理，由主细胞库和工作细胞库组成；细胞传代到一定代后，致瘤性增加，必须进行致瘤性检查和核型分析；细胞鉴定：细胞鉴定、外源因子污染、致瘤性、核型或染色体检测、外源病毒。灭活剂福尔马林：它只在与病毒蛋白作用之初形成羟甲基化合物，其反应是可逆的，但一旦形成交联则不可逆。福尔马林相互作用蛋白的结果是病毒交联或病毒颗粒凝集。同时，这种作用限制了福尔马林对核酸的灭活作用，因此在某些情况下，尽管病毒抗原被严重破坏，但某些病毒仍能存活。 -丙内酯的优点：直接作用于病毒的DNA或RNA，打断病毒的核酸，使其无法复制遗传物质，在不破坏病毒外层蛋白的情况下发挥作用：-PL水解成-羟基丙酸（无毒）；疫苗无残留，不影响疫苗稳定性，灭活效果可靠。缺点：-丙内酯与牛血清白蛋白合用会引起过敏反应。

研究发现，接种该疫苗引起抗牛白蛋白IgE产生的原因是疫苗中的-丙内酯与牛白蛋白结合，破坏了-丙内酯-牛白蛋白的结合，从而使被接种者动物产生抗牛白蛋白IgE，发生过敏反应。新霉素是国外最常用的抗生素，而青霉素、链霉素、庆大霉素和卡那霉素在我国均有使用。临床上多采用新霉素外用，而青霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素多用于肌注和静脉注射；抗生素只能在细胞制备阶段使用。国内企业在多个生产环节添加抗生素，导致疫苗中抗生素含量高，是疫苗不良反应的原因之一；疫苗中新霉素引起过敏反应的风险低于青霉素、链霉素和庆大霉素因子、卡那霉素。动物血清引起的问题细胞、细菌和支原体的过度生长；补体、免疫球蛋白、生长抑制因子等有害物质不明确，影响结果分析；检测、下游加工和纯化；痕量残留蛋白抗原性；抗体和抗体引起的减产；支原体、病毒和朊病毒的突然污染；诱导分化；不同批次之间的差异；地区、季节和个人的差异；不确定因素多；细胞传代培养应注意的几个问题。前期工作中，细胞瓶的新转瓶处理不当，玻璃中的二氧化硅释放过多，会损伤细胞；最后一步冲洗转瓶应使用去离子水而不是注射用水。瓶子不能正确清洗；残留洗衣粉或洗涤剂；如果细胞瓶塞使用对细胞有毒的回收橡胶塞，建议使用硅胶塞；管道系统中用于细胞塞的所谓“不锈钢”管对细胞有毒，建议使用玻璃管，同时更换硅胶管。营养液成分水：注射用水经阴阳离子交换柱处理，电导仪检测；基础培养基来源：进口产品质量相对稳定可靠，国产产品批次间质量不稳定；基础培养基引起细胞凋亡。血清：过滤，钴60辐照灭菌。内毒素含量很高，前者往往杀菌不彻底，后者可以解决支原体污染，但照射剂量大容易破坏生长因子，影响细胞