制备自家苗预防仔猪大肠杆菌病

仔猪黄白痢是猪场广泛存在的一种常见病，不仅给养猪业带来大量的药物支出，而且直接影响仔猪的生长发育。引起仔猪黄白焦病的大肠杆菌菌群众多，抗原结构复杂（O抗原、H抗原、K抗原），菌群流行有地域差异，控制难度大。 l 材料1.1 疾病材料广西省武鸣县2头仔猪肠内容物和肠粘膜碎屑4份，发生仔猪黄化和白痢。 1.2 麦康凯培养基、马丁肉汤、三糖铁、普通琼脂、厌氧肝肉汤、血琼脂斜面。 1.3实验动物及其他小鼠18只，体重约18-22g；甲醛溶液和氢氧化铝溶液。 2 方法与结果2.1 分离与鉴定2.1.1 分离与形态鉴定：将上述4种病材用灭菌生理盐水稀释后，接种于MacConkey平板培养基上，37恒温培养箱培养16天。 ~18 小时，挑选可疑的红色菌落进行革兰氏染色。大肠杆菌经镜检可初步鉴定为大量中型红色杆菌。 2.1.2毒性鉴定：为测定分离菌的毒力，将上述新鲜马丁肉汤的纯培养物接种于血琼脂斜面培养基中，于37培养箱中培养，同时用适量无菌生理盐水稀释后，接种小鼠（每只病材2只小鼠），0.5 ml/只。发现血琼脂斜面培养有溶血现象；观察小鼠接种后的状态，接种3小时后死亡2只，24小时后死亡6只。另2只小鼠仅表现出一定程度的抑郁，逐渐恢复正常。 2.1.3 生化鉴定：解剖死小鼠后，无菌收集死体，经镜检后分别接种于马丁肉汤和三糖-铁培养基中，培养箱中培养。可以看出马丁肉汤混合了；糖-铁培养基完全变黄，穿刺线周围出现许多气泡，说明受试菌能分解糖分产酸产气。经显微镜检查和稀释后，确认马丁肉汤和嗜血细胞培养物未被其他杂菌污染，将两种培养物保存在4'C冰箱中。 2.2 种苗准备及检验2.2.1 种苗准备及纯度检验：取上述保藏培养物接种新鲜血斜面复壮培养基，用无菌生理盐水或马丁肉汤洗涤菌层，检验培养物的纯度。检查合格后，可转入50ml大试管马丁肉汤中培养。将纯检后培养12 h以上的马丁肉汤培养物接种于数块直径为18 mm的普通琼脂平板上，均匀铺开（每块约0.5 ml），同时取另一份肉汤培养物用于稀释并接种在普通琼脂平板上进行活菌计数。当培养物覆盖整个平板时，一一检查其上是否有细菌污染。除去污染的平板，将剩余的平板全部转移到低温空调房内，使琼脂受凉变硬，易于刮除菌苔。 2.2.2 混苗：无菌条件下每盘加入约10 ml Martin Broth 浸泡，用灭菌止血钳夹住75%酒精浸泡灭菌的载玻片（时间，然后用酒精烧灯）刮去板中的菌液。每块板用约50 毫升马丁肉汤冲洗3 次。将洗净的菌液全部注入500毫升灭菌生理盐水瓶中，取菌液接种于血斜面、马丁肉汤和厌氧肝肉汤培养无异常菌后，另取少量菌液于灭菌后放入。青霉素瓶中活菌计数，其余按菌液总量0.5%的比例加入甲醛溶液（37%-40%），37培养箱48小时灭活（摇匀）在4-40% 期间）。 6 次）。根据活菌计数结果，将收集的灭活菌液用10%无菌氢氧化铝浓缩，使制备的疫苗中大肠杆菌数在100亿以上；灭活试验在汤中进行。检验合格的疫苗分装入100毫升疫苗瓶中，贴上标签，室温保存备用。 2.2.3 安全性和有效性试验：用试制疫苗接种5只小鼠，未发现不良反应（0.5ml/只），安全率为100%。 15天后，对照组有5只大鼠在用分离的强毒活菌溶液攻击后36小时内死亡；试验组死亡5只，死亡1只，保护率达80%。

2.2.4 免疫：将配制好的疫苗寄给两个原发病猪场。建议在分娩前10-20天尝试一些母猪（1毫升/头）。根据养殖场反馈的信息，2头试验母猪注射后精神、食欲均无异常，分娩仔猪发病期间无明显腹泻，说明大肠杆菌自制本次制备的疫苗能够较好地控制原发病猪场仔猪大肠杆菌的发生，效果明显优于以往使用的商品疫苗，达到预期效果。 3 讨论仔猪黄白痢是由致病性大肠杆菌引起的较常见的肠道感染病。由于引起黄白腹泻的大肠杆菌血清型较多，各猪场血清型不一致，在防控中使用商品疫苗或抗生素难以达到预期效果（进口疫苗较好，但成本较高）。因此，根据该病的实际情况，选择与场内血清型一致的疫苗或自制疫苗对产前母猪进行免疫，是预防仔猪大肠杆菌病的有力措施。仔猪大肠杆菌病虽然是由致病性大肠杆菌感染引起的，但该病的发生也与仔猪的抵抗力、环境条件和饲养管理措施密切相关。因此，除了及时接种合适的疫苗外，还应注意加强日常卫生和饲养管理，减少环境诱因和应激反应；消毒工作；做好母猪产前补硒和仔猪产后补铁补硒工作；保证育苗室内有一定的保温干燥效果；对病猪及时进行隔离消毒，选择敏感药物进行治疗等，达到综合防治的目的。