影响蛇毒抗原抗体反应的因素


(-)温度

适宜的温度可加速蛇毒抗原与其抗体的结合,提高反应速度,一般在154,最适温度为37。 56欧以上会引起抗原抗体复合物的解离,容易破坏补体。 60X以上会引起抗体球蛋白的变性和某些抗原的破坏。

温度的影响主要是因为温度的升高可以加速反应物抗原和抗体的分子运动,使抗原和抗体碰撞的机会增加,从而很容易相遇结合,也可以促进第二阶段反应中抗原、抗体及其介质之间的相互作用。加速反应现象。因此,蛇毒的抗原抗体反应最好在37左右进行。

(2)酸碱度

不同的pH值会影响反应物的电离和电荷特性,尤其是抗体球蛋白的电离和电荷特性。反应物在等电点的pH环境下不带电荷,此时不发生非特异性反应或沉淀。免疫球蛋白的等电点为pH4.86.6,抗原抗体反应最适pH为6.08.0,低于pH3.0会发生非特异性酸聚集。

(3) 电解液

血清学反应需要适量的电解质,在没有电解质的情况下不会出现可见的反应。蛇毒抗原与抗体的结合可能不需要电解质辅助,但存在抗原抗体偶联物的聚集反应或沉淀反应、补体结合反应等必要的电解质。因为蛇毒抗原和抗体都是蛋白质,在溶液中都属于胶体物质,都带有电荷。胶体颗粒还带有许多强极性基团(如羧基、氨基、肽链等),与水有很强的亲和力,使颗粒周围形成一层水层,称为亲水胶体。因此,亲水胶体比没有水层的疏水胶体更易溶解。抗体和抗原在未结合时都是亲水性胶体,但当两者相应的极性基团(如羧基、氨基等)相互吸附后,就不能再与水分子结合,所以它们失去亲水性并变成胶体。疏水性胶体此时易被电解质中和,失去电荷,电位降低,相互聚集,表现出各种肉眼可见的反应。这种抗原抗体反应的速度随着盐浓度的增加而加快,最佳浓度为0.85%生理盐水等渗溶液。过高浓度的盐溶液(15%)会阻碍抗原与抗体的结合,使抗原抗体凝集或沉淀解离。较高浓度的盐溶液(半饱和至饱和)可以完全消除反应物上的电荷,即使是简单的抗原或抗体,也会发生特异性沉淀,称为盐析。

(4) 振动搅拌

振动和搅拌能显着提高抗原抗体的反应速度,明显加速抗原抗体偶联物的相互聚集,因为增加了反应物碰撞和接触的机会,其作用与反应物的粒径成正比。振动或搅拌可使蛇毒及其抗体的沉淀反应和间接的天然胶乳凝固反应速度提高一倍以上。

(5) 其他因素

非特异性血清蛋白含量过高,会影响、阻碍或延缓抗原抗体反应,这是由于其对胶乳的保护作用,增加了反应液的粘度。这在蛇毒与抗体和血凝反应的间接天然乳胶反应中最为明显。

Lipidoid 从抗体血清中去除类脂质,这会阻碍凝集物和沉淀物的形成。类脂质对于抗原和抗体的结合并不重要,但对于偶联物的聚集非常重要,其作用机制目前还不清楚。

糖高浓度的糖可防止抗原和抗体形成凝集物或沉淀物。高分子葡聚糖能使红细胞发生自身凝集。

蛇毒一些蛇毒如眼镜蛇毒是一种强碱性蛋白质或多肽,易引起载体颗粒(如天然胶乳等)的非特异性聚集。以强碱性蛇毒为受试物进行间接载体(天然乳胶)抑制试验时,在反应液中含量较高的情况下,容易发生非特异性凝集,出现假阳性。蛇毒的强碱性PLA2能水解红细胞膜磷脂,释放出溶血磷脂,引起溶血(也可能与其分子中电荷较高有关)。因此,当血细胞被含有强碱性PLA2的蛇毒致敏时,应注意出血的发生。

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