蛇毒出血毒素鉴定

蝰蛇科和响尾蛇的蛇毒含有出血性毒素，被咬中毒后可引起局部组织损伤和出血。患者有广泛的血液外渗，导致明显的全身出血，咬伤部位出现出血性水肿。严重者可出现躯干、心、肺、胃肠道、肾脏等内脏出血，并可出现呕血、便血、尿血等，因大量失血休克而死。因此，出血毒素具有很强的致死毒性。 Agkistromus acutus之所以被称为“五步蛇”，是因为它的毒性很强。其蛇毒中的出血毒素含量很高，是致死的主要因素。

大多数出血毒素具有蛋白水解活性。出血毒素是一类金属蛋白，故其出血活性可被金属螯合剂（如EDTA）抑制。如果去除这类蛇毒中的Ca2+、Mg2+或Zn2+，它们的出血作用就会消失。常用止血药对蛇毒引起的出血无明显止血作用，但EDTA可抑制出血活性，临床试验可局部使用。

常用的出血性毒素鉴定方法有以下三种：

方法1（近藤等人，1960 年）

剪下家兔背部毛发，皮下注射0.1ml蛇毒稀释液至该处，24h后处死家兔取皮，从皮肤内表面测量出血点大小，以致平均直径为10mm的出血点所需剂量为最小出血剂量（MHD）。目前大部分方法都是在大鼠或小鼠身上进行的，尤其是小鼠皮下组织对出血性毒素非常敏感。

方法二(Bonta et al. 1970)

将直径5mm的滤纸片浸泡在蛇毒稀释液中，3分钟后取出，放在犬肺表面，然后取出滤纸片，肉眼直接观察，记录取出滤纸片后10分钟内出血。用不同浓度的蛇毒重复上述过程，得到止血作用的剂量关系。

方法三（刘广芬等，1980）

本方法用于测定蛇毒对动物腹腔的局部止血作用。体重为18g24g的小鼠40只，雌雄不限，分为两组，一组腹腔注射毒蛇毒5ug/10g体重，另一组腹腔注射蝰蛇毒80ug/10g体重。毒蛇毒组注射后约10小时死亡，尸检腔内未见出血，仅有肠系膜血管扩张和肝淤血。 Agkistrodon 毒液组在注射后约2 小时死亡。剖检腹腔内大量出血，肠系膜血管明显扩张，有血块附着，肝瘀。