蛇毒 降压组分的分离纯化

对蝰科毒蛇咬伤早期症状的研究表明，动物血压下降是主要症状之一，但所用的实验材料是粗毒液。蝰蛇毒中丰富的酶类和有毒成分，使其降压机制十分困难，必须首先获得能引起血压升高的纯成分。王玉珍等。从Akikikiki Agkistrodon 的毒液中分离出一种纯抗高血压成分。经测定，该成分无蛋白水解酶活性，无pla2活性，无精氨酸酯酶活性，无心动过缓释放酶、碱性磷酸单酯酶和5'-核酸酶活性。在生理活性方面，它也没有出血、溶血和纤溶活性。提纯方法如下：

DEAE-SephadexA-50柱层析粗毒3g溶于30ml0.1mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液中，离心5min，取上清液上柱(4cmX80cm)，洗脱曲线见图3- 13-23A。采用测定家兔动脉血压的方法，峰5有明显的降压作用，采集该峰并冻干，约200 mg，各批次分离略有差异。

SephadexG-75柱层析上一步得到的峰5浓缩液的SephadexG-75柱(3cm100cm)平衡洗脱液为

15mol/LNaCl，结果见图3-13-23B。峰2有降压作用，脱盐冻干得到50mg，每次结果略有不同。

对于CM-SephadexC-25柱层析，将上一步得到的峰2组分用醋酸钠缓冲液（pH6.5）透析，上柱（1.5cmX40cm）。洗脱过程如图3-13-23C所示。峰1为降压成分，经脱盐冻干得到25mg，活性纯化倍数为5倍。

神经生长因子（NGF）是一类感觉和交感神经元生长发育的重要因子。 An-geletti 等人。从印度眼镜蛇毒液中分离纯化NGF，并测定了该NGF 的氨基酸组成和部分序列。服务器等。比较了印度眼镜蛇毒NGF 和小鼠颌下腺NGF 的结构和功能。蛇毒中NGF的纯化因蛇毒不同而异。下面是雷少波等人的方法。从中国眼镜蛇毒液中纯化NGF。

SephadexG-50柱层析眼镜蛇粗毒3g溶于10ml 1%醋酸溶液。 3000r/min离心10min后，上清液上45cmX128cm柱。用1%乙酸洗脱，流速32ml/h，8ml/管分次收集。测量洗脱液在280nm波长处的吸光值，如图3-13-24所示。

CM-Cellulose32柱层析取上步层析的活性成分276mg溶解于5ml05mol/L醋酸钠缓冲液(PH5.0)中，离心后上样于2.0cm89cm柱上。先用起始缓冲液洗脱，再用0mol/L到1.0mol/LNaCl的凸梯度洗脱。流速为60ml/h，分次收集10ml/管。如图3-13-25所示，可以分离三个峰。分别收集峰，透析脱盐并冷冻干燥。峰2 具有NGF 生物活性。

Sephai:ose6B柱层析提取出约49.8mg第二步的NGF组分，加入2.0ml 0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.5)中。离心后，将样品加载到2.5cmX160cm柱上，并以18ml/h的流速用相同的缓冲溶液洗脱，以6ml/管的部分收集。如图3-13-26所示，两个峰可以分开。分别收集峰，透析除去盐分，然后冷冻干燥。第一个峰具有NGF生物活性，得到约12mg的纯NGF。