蛇毒单克隆抗体的应用

(一)蛇咬伤的诊断

目前，用于蛇咬伤诊断的蛇毒抗体基本上是蛇毒免疫动物产生的种属特异性抗体，经纯化制备，均为多克隆抗体。制备非常纯和高特异性的蛇毒抗体并不容易，尤其是那些含有较多普通抗体成分的抗蛇毒血清，纯化难度更大。这会影响诊断的特异性，尤其是ELISA等高灵敏度的血清学方法，所用的种属特异性抗体如果有微量的普通抗体就会发生交叉反应。使用高亲和力的特异性单克隆蛇毒抗体就避免了这个问题，因为筛选出的杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体的特异性是绝对的，所有分子完全相同，从而使阳性诊断的准确率提高到更大程度。而且，一旦建立了分泌某种蛇毒McAb的杂交瘤细胞系，将源源不断地提供更廉价、更优质的试剂。

(2)蛇咬伤的治疗

人抗蛇毒单克隆抗体将在蛇咬伤的治疗中开辟广阔的前景，因为它既可以避免异种动物抗体血清的过敏反应等副作用，又可以以其高滴度和高特异性发挥更大的中和作用。治疗效果。可以想象用各种蛇毒的各种毒性成分的单克隆抗体组成各种有效的单抗治疗剂，解决严重的肌肉坏死、出血等，致死作用会有什么样的治疗效果。 1988 年，Kaiser 和Middlebrook 建立了一种中和响尾蛇毒素的McAb。包含4个IgG亚类McAbs，是针对鼠毒素基本亚基的高价抗体，其中1个对纯化的完整鼠毒素具有极强的中和能力，在lm0I/L的基础上，1个大分子纯化的McAb可有效中和约1.6mol/L的鼠毒素。这种中和性单克隆抗体对毒液中存在的莫哈维毒素有效，中和南美响尾蛇亚种毒液的杀伤力比响尾蛇多价血清强4倍。

(3) 预防毒蛇咬伤

由于现代科学技术的发展，各种贮存型蛇毒单克隆抗体制剂的应用已成为可能。制剂在体内缓慢释放几个月的时间，可以预测或监测释放时间，从而可以确定地知道再次注射。如果这种“定时释放”技术能够成功地释放人体抗蛇毒单克隆抗体，就可以有效防止毒蛇咬伤。

（四）蛇咬伤的发病机制研究

利用高亲和特异性单克隆抗体的RIA和ELISA观察蛇毒在体内的定位、血液中蛇毒的含量和动力学变化等，在某些方面优于多克隆蛇毒抗体。此外，还可广泛用于蛇毒中毒机理的研究。 1987 年，Pukrittayakamee 等人。等采用单克隆抗体竞争性放射免疫法测定了4例被毒蛇咬伤患者血清中毒蛇毒液的X因子激活剂。使用该方法，在尿液中的灵敏度为4Mg/ml，在0.1% 牛血清白蛋白-PBS 中为20/ug/ml，在血清中为5 pg/ml，并且发现眼镜蛇毒和毒蛇毒之间存在交叉反应。但眼镜蛇毒缺乏凝血活性，两者很容易区分。 1988年，伊登还开发了一种单克隆抗体，可以中和西非毒液的出血活性。通过ELISA和免疫印迹证实，它对毒液的毒液具有高度特异性。发现它具有很强的抗出血活性。因此，其具有从斑叶蝰蛇全毒液中分离出出血性毒素的潜在应用价值，从而有可能阐明其作用机制以及与抗体的相互作用。这种高度特异性的单克隆抗体将在研究毒蛇毒液主要致死成分的致病作用方面发挥重要作用。

（五）其他方面

单克隆抗体具有单一表位的特异性，因为它可以在分子水平上从结构上分析各种物质，所以可以分析蛇毒表位的数量和位置以及蛇毒的共同抗原蛇毒单克隆抗体。在20 世纪80 年代中期，Danse 等人。建立了珊瑚蛇a-bungare神经毒液的单克隆抗体，并对Cobra和Sea Snake蛇毒的神经毒素进行了分析，发现这两个家族的神经毒素分子相当小，只有60~70个氨基酸残基，但仍具有免疫原性多态性，具有3 或4 个表位，同时对特定抗体敏感。 1985年，Kfir等人制备出抗眼镜蛇心脏毒素V1特异性McAb。采用杂交瘤技术的杂交瘤属于小鼠IgG亚类，对心脏毒素具有高亲和力，但能抵抗心脏毒素的致死活性和对红细胞的抗毒素作用。因此，认为该蛇毒的心脏毒素的抗原位点和活性中心是分开的。佩雷等人。使用McAb（sp2/0 骨髓瘤细胞融合）对抗西部小菜蛾响尾蛇毒液的出血活性，并应用ELISA 研究13 种相关蛇毒液之间的关系。 1986 年，Rael 等人。建立了分泌抗莫哈维毒素的单克隆抗体杂交瘤细胞系。该McAb 用于鉴定响尾蛇和响尾蛇科其他毒蛇的交叉反应蛋白，并用于分离莫哈韦沙漠毒素。该抗体可识别粗等电聚焦免疫印迹和通过免疫亲和层析纯化的莫哈维毒素中5.1 至6.1 等电点的五个条带。抗体的特异性是针对毒素的基本亚基。该亚基可分解成4条带，等电点分别为9.3和9.6。得克萨斯州和南亚利桑那州蛇的每一种响尾蛇毒液都具有4.9 到6.3 范围内的多个等电点

腰带。响尾蛇毒液电泳还可以识别交叉反应蛋白。 1988年，Lomonte和Kahan从7种小鼠体内制备了抗巴西白蛇肌毒素的单克隆抗体，并对其特性进行了一些研究。发现与粗毒发生交叉反应的基本成分至少有4种，经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定有一个共同的亚基，分子量为16000，但电荷略有不同。分析这些肌毒素相关成分可能是蛇毒的特异性对象，采用蛋白质印迹法（Westernblotting）和EIA联合技术对几种单克隆抗体进行检测，发现与基本蛇毒成分存在不同的反应性，表明它们的表位特异性不同。

另外，利用蛇毒单克隆抗体的免疫亲和柱纯化蛇毒可以获得相当的特异性。

抗体-蛇毒素结合物是当前一种新型的特异性免疫治疗剂。前者起到结合作用，后者 起到毒性作用。通常用肿瘤的单克隆抗体同细胞毒素结合来治疗肿瘤。目前所用的毒素 主要是细菌毒素如白喉毒素、植物毒素如相思豆毒素、蓖麻毒素和天花粉。蛇毒的细胞毒 对肿瘤细胞有明显的抑制和破坏作用，也是一个很好的“弹头”，可以同肿瘤单克隆抗体结 合成为免疫毒素的“魔弹”而应用于临床。