蛇毒中有一种成分，主要作用于局部组织，引起肌肉坏死，从而引起肢体残疾，称为肌毒素或肌坏死毒素。这种毒素会使被咬伤肢体的肌肉、肌腱甚至软骨坏死脱落，导致肢体永久性功能障碍，甚至不得不截肢。在各种蛇毒中，响尾蛇，包括蝰蛇科的肌肉坏死作用最强，其次是眼镜蛇和蝰亚科毒液。
肌毒素的测定，可用动物实验。给家兔肌肉注射蛇毒或分离成份，将中毒肌肉做组织切片，在显微镜下观察，计算肿胀和坏死的程度。这种方法适合在实验室使用。
临床上也发现，中毒后血清肌酸激酶水平的变化与局部组织损伤或坏死的程度相一致。因此，定量测定血清肌酸激酶值作为判断肌肉坏死程度的指标将非常有利于实验室研究和指导临床治疗。如果在蛇咬伤早期，能够定量测定被咬伤的局部受损组织可能受到的损伤程度（主要是肌肉毒素引起的肌肉坏死），及时采取有针对性的防治措施，可以大大减少残疾。率和截肢率。
(-) 溶肌活性的测定（康连迪等，1983）
用0.15mol/LNaCl溶液配制蛇毒或蛇毒成分，浓度约为0.5mg/ml，注射0.1ml于小白鼠鳃肌内，12h后剥离注射部位腿部肌肉，戊二醛固定和锇酸，然后用丙酮逐级脱水，环氧树脂618包埋，在超薄切片机上切片，用乙酸双氧铀和柠檬酸铝干燥，最后在HU-11电子显微镜上观察。计算肿胀和肌坏死的程度。这种方法只能用于实验，不能用于临床。
(2)血清肌酸磷酸激酶的测定
磷酸肌酸激酶（简称CPK）广泛存在于骨骼肌、心肌和脑组织中。心肌梗塞、肌肉损伤等可引起CPK活性升高，某些蛇毒的肌毒素也可引起CPK浓度升高。临床上可以用CPK活性来衡量肌肉损伤的程度。 CPK 催化以下反应：
肌酸磷酸激酶的测定方法很多，利用上述正反反应即可测定。主要有分光光度法和光电比色法两种。分光光度法灵敏，结果也比较准确，但需要特殊的酶制品和紫外分光光度计，目前一般实验室无法开展。现在比较常用的有以下两种比色法： 一种是利用正向反应生成不稳定的磷酸肌酸。磷酸肌酸在等量酸溶液中室温完全水解30分钟生成磷酸（此时ATP和ADP仍稳定），然后测定磷酸量，根据磷酸量计算酶活力生成磷酸。另一种是利用逆反应。此时磷酸肌酸和ADP在酶的作用下生成肌酸，肌酸与双乙酰和萘酚结合生成红色化合物。在一定范围内，红色的深浅与肌酸的含量成正比，根据肌酸的产生量计算酶的活性。与上述两种方法相比，以磷酸肌酸为底物的方法，在合适的条件下，反应速度比以肌酸为底物的方法快6倍，且不受无机磷的干扰。此处描述了这种比色法。
血清肌酸磷酸激酶肌酸显色法测定如下：
原理磷酸肌酸和ADP在肌酸磷酸激酶的催化下转化为肌酸和ATP，生成的肌酸与-萘酚和双乙酰反应生成红色化合物。在一定范围内，红色的深浅与肌酸含量成正比。与同法处理的肌酸标准溶液比色，即得酶活。
试剂
混合基质
pH7.4 Tris-盐酸缓冲溶液： 称取Tris(Tris)2.42g，加蒸馏水至100ml，再加入0.2mol/L盐酸88.8ml和无水硫酸镁(MgSO4)0.34g，调节pH至7.4 .该溶液可在室温下保存数月。
0.012mol/L磷酸肌酸溶液： 称取0.436g磷酸肌酸钠，加蒸馏水至100ml，调pH至7.4，-25或冰箱上层冰盒中保存，可使用约1个月.
0.004mol/L 二磷酸腺苷溶液： 称取二磷酸腺苷钠盐0.233g，加蒸馏水至100ml，调pH 值至7.4，于-25或冰箱上层冰盒中保存，可长期保存大约1个月。
使用前，将上述、、试剂各10ml混合，30ml混合底物中加入半胱氨酸盐酸盐0.105g，调pH至7.4。本试剂最好新鲜配制，也可冷藏保存。一般可存放57天。如果空白管吸光度过高，说明有游离肌酸存在，即不能再次使用。
0.15mol/L 氢氧化钡溶液： 称取氢氧化钡[Ba(OH)2.8H20]4.73g，加蒸馏水溶解（加热可助溶）并定容至100ml。
5%硫酸锌溶液：称取8.8g硫酸锌（ZnSO4.7H2O），加蒸馏水溶解并定容至100ml。以上两种溶液（2）和（3）配制好后，需要进行滴定，可按如下方法进行： 取5%硫酸锌5ml，置于50ml锥形瓶中，加2滴酚酞指示剂，用0.15mol/L氢氧化钡溶液滴定至呈粉红色。氢氧化钡的用量应与硫酸锌的用量相等。如果不相等，可以稀释更浓的溶液。
肌酸标准溶液（1.7nm0l/L） : 准确称取无水肌酸22.3mg，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。在冰箱(4C) 中储存数天。
双乙酰溶液：先配成1%的水溶液，装入棕色瓶中，放入冰箱冷藏。使用前用蒸馏水稀释20倍。
碱液贮存：称取氢氧化钠30g、无水碳酸钠64g，加蒸馏水溶解并稀释至500ml。室温低时，可析出沉淀。此时应置于37水浴中待沉淀溶解后使用。
a-萘酚溶液： 称取a-萘酚1g，用上述贮存碱液溶解并稀释至100ml。此溶液必须新鲜配制，否则空白管的吸光度读数会升高。
操作见表3-14-3。
表3-14-3 肌酸磷酸激酶显色法测定操作步骤
加 入
物
(ml)
空白管
标准管
测定管
混
合底
物
0. 75
0. 75
0. 75
血
清
0. 1
标准肌酸(1.7nmol/L)
0.1
蒸
馏
水
0. 1
置37°C水浴保温30min
氢
氧化
钡
0. 5
0. 5
0. 5
硫
酸
锌
0. 5
0. 5
0. 5
蒸
馏
水
0. 5
0. 5
0. 5
混勻，离心5min-
、1 Omin
上
清
液
0. 5
0. 5
0. 5
萘
酚
1
1
1
双
乙
酰
0. 5
0. 5
0. 5
置37°C水浴保温15min
蒸
馏
水
3
3
3
离心3min〜5min
如呈色明显清晰透明，最后一次离心可以省去。用520nm波长滤光板进行比色，读取 各管吸光度读数。
单位定义以lml血清在37°C与底物作用lh，生成lftmol肌酸为1个磷酸肌酸 激酶活力单位。
正常参考范围0〜3.2IU。
(三）舒缓激肽增强肽(BPP)
检测方法(何子安等，1981):
取体重300g〜400g豚鼠，雌雄不拘，猛击头部致昏，立即开腹，取回肠15cm，用经 95%02-5%C02混合气体饱和的Kreb’s营养液冲洗肠腔内容物。在靠近回盲部取回肠 1. 5cm〜2. Ocm，细心剥离纵行肌,两端用线缝扎，一端固定于玻璃容器底部，此容器装有 10ml Kreb’s溶液，并不断地通过95%02-5%C02混合气体，整个容器置于371：水浴中。 纵行肌的另一端连接在应变器的反变片上。预先加张力lg，稳定30min后开始给药，用微 量注射器注入一定量的舒缓激肽，纵行肌开始收缩，收缩幅度通过应变片肌肉等长收缩仪 传动描记。由于动物有个体差异，舒缓激肽的取量一般在0. 05/xg〜0. 5Mg之间，寻找一个 使收缩幅度适中的量。以BPP在离体豚鼠回肠上增加舒缓激肽收缩作用的能力来作为 BPP活力测定的指标。加入固定量舒缓激肽，收缩至峰顶时，用Kreb’s溶液冲洗3次〜5 次，待3min〜5min纵行肌恢复到原先自发收缩幅度以后，加入适量的BPP(大约为2叩/ ml)，保温15s，再加相同量的舒缓激肽，此时，纵行肌的收缩幅度较之舒缓激肽本身有明 显的增加。规定对照的幅度为1，增加后的收缩倍数即为BPP的相对活力，相对活力再除 以BPP样品溶液的蛋白浓度值，即为相对比活力。
(四）毛细血管通透因子
检测方法(Milos等，1955):
把体重2kg〜2. 5kg的家兔毛拔去，24h后静脉注射20mg Evans蓝,Evans蓝用生理 盐水配制，浓度为1%。继之在皮下注射待测样品溶液，注射量以鼓起直径为9mm〜 11mm的泡为准。60min后处死家兔，剥皮并按原来大小固定在玻璃板上，测定注射样品 处染料扩散区域的大小，如直径等于或大于9mm〜11mm，说明该样品对毛细血管的通透 性起增加作用。用生理盐水作对照，对照点应看不出有染料扩散。
(五）细胞凝集素
检测方法是把血小板和待测细胞制成4ml的5. 0105细胞悬液(用Hank液配制）， 取0.9ml细胞悬液加0.1ml细胞凝集素（用Hank液配），混匀，细胞凝集素的浓度为 10Mg/ml〜1 000Mg/ml。在37°C下保温，半小时后每隔一定的时间搅动一次，肉眼观察细 胞的凝集情况，在显微镜下照相，并比较和植物凝集素PHA之间的差别。
(六）神经生长因子(NGF)生物学活性鉴定
按Maximov双盖片法进行培养。培养材料为9天鸡胚的背根神经节。培养基组成为： 1/3雄鸡血浆,l/3Eagle’S MEM培养液(补加凝血酶原0. 5mg/ml)和1/3待检测的样品 液。培养基体积为3cm3。样品用Hank液倍数稀释，使之成为一系列不同浓度，每个浓度 做5个培养，对照组加入不含样品的等量Hank液，培养温度为37士0. 5 °C，时间为18h。
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